Mengoptimumkan Integriti Selular E. coli untuk Pengeluaran Biopharma

Dalam bidang biofarmaseutikal, Escherichia coli (E. coli) memainkan peranan penting sebagai perumah bagi ekspresi protein rekombinan. Integriti selular E. coli adalah penting untuk hasil protein, kualiti dan kos pengeluaran. Integriti ini terutamanya melibatkan struktur dan fungsi membran dalam (IM) dan membran luar (OM).

Yaohai Bio-Pharma mempunyai 15 tahun dalam penapaian E. coli dan ekspresi protein rekombinan. Kami menggunakan pelbagai strategi untuk mengekalkan integriti selular E. coli yang tinggi, hasil plasmid melebihi 1g/L dalam kitaran penanaman selama 30 jam. Berdasarkan pengalaman luas dalam ekspresi mikrob, Yaohai Bio-Pharma telah merumuskan beberapa strategi berkesan untuk memantau dan meningkatkan Integriti selular E. coli semasa pengeluaran biofarmaseutikal.

Teknik Memantau Integriti Selular E. coli

Flow Cytometry: Menggunakan pewarna pendarfluor untuk membezakan keadaan selular, seperti propidium iodide untuk mengesan daya maju sel dan SYTO9 untuk menilai kebolehtelapan OM. Walau bagaimanapun, ia memerlukan kos noda yang tinggi dan operasi yang kompleks.

Kaedah Kolorimetrik: Mencerminkan lisis sel dengan mengesan kandungan DNA, aktiviti enzim, dsb., dalam supernatan, seperti menggunakan kit reagen PicoGreen dan ujian aktiviti alkali fosfatase. Kaedah ini, bagaimanapun, adalah rumit dan memerlukan reagen yang mahal.

Kromatografi Cecair Berprestasi Tinggi: Digunakan untuk pengesanan luar talian kepekatan produk ekstraselular untuk menilai kebocoran OM. Namun, automasinya adalah kompleks dan masa analisis adalah panjang.

Teknik Spektroskopi Getaran: Seperti spektroskopi inframerah dekat dan inframerah pertengahan, yang mempunyai potensi aplikasi tetapi memerlukan mengatasi gangguan spektrum dan cabaran analisis data.

Spektroskopi Dielektrik: Menilai integriti membran dengan mengukur impedans penggantungan sel, membolehkan pemantauan dalam talian masa nyata. Walau bagaimanapun, ia terdedah kepada gangguan dan penentukuran adalah sukar.

Biosensor: Boleh mengesan sebatian yang bocor dari dalam sel atau periplasma, tetapi menghadapi masalah seperti kesukaran penjanaan semula sensor.

Pengukuran Kelikatan dan Ketumpatan: Kos rendah dan cepat dalam analisis, tetapi kurang selektiviti dan memerlukan pertimbangan data berbilang kelompok untuk pertimbangan.

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Integriti Selular

Kejuruteraan Terikan: Mengubah integriti OM melalui kejuruteraan genetik, seperti memutasi gen lipoprotein, tetapi boleh memberi kesan kepada pertumbuhan terikan.

Tekanan Terinduksi: Ekspresi berlebihan protein rekombinan membawa kepada beban metabolik, menjejaskan fisiologi selular. Oleh itu, peraturan yang munasabah tahap ekspresi adalah perlu.

Kadar Pemakanan Substrat: Kedua-dua kadar pemakanan yang terlalu tinggi dan rendah menjejaskan lisis sel dan integriti OM.

Suhu dan Pengudaraan: Suhu tinggi dan ketersediaan oksigen rendah masing-masing meningkatkan tekanan ekspresi dan kebocoran OM, tetapi kesan khusus berbeza-beza.

Osmotik: Digunakan untuk membebaskan protein periplasmik tetapi merosakkan daya maju sel, mengehadkan penggunaannya.

Kesimpulan Penyelidikan masa depan perlu mendalami mekanisme dan keadaan pembaikan membran untuk mengawal integriti membran selular dengan tepat. Mengoptimumkan kaedah pemantauan, dan menganalisis faktor yang mempengaruhi dijangka dapat meningkatkan kualiti produk, dengan itu memacu pembangunan industri biofarmaseutikal.

Kami juga sedang giat mencari rakan kongsi global institusi atau individu. Kami menawarkan pampasan yang paling kompetitif dalam industri. Jika anda mempunyai sebarang pertanyaan, sila hubungi kami di [email protected]