Membaiki Kebulatan Sel E. coli untuk Pengeluaran Biopharma

Dalam bidang bi farmaseutikal, Escherichia coli (E. coli) memainkan peranan penting sebagai hos bagi ungkapan protein rekombinan. Kegunaan sel E. coli adalah perkara utama untuk hasil, kualiti dan kos pengeluaran protein. Kegunaan ini terutamanya melibatkan struktur dan fungsi membran dalam (IM) dan membran luar (OM).

Yaohai Bio-Pharma mempunyai 15 tahun pengalaman dalam fermennasi E. coli dan ungkapan protein rekombinan. Kami menggunakan pelbagai strategi untuk mengekalkan integriti sel E. coli yang tinggi, hasil plasmid melebihi 1g/L dalam satu kitaran penanaman sepanjang 30 jam. Dengan mengambil keupayaan luas dalam ungkapan mikrobial, Yaohai Bio-Pharma telah merangkumi beberapa strategi berkesan untuk memantau dan meningkatkan integriti sel E. coli semasa pengeluaran bi farmaseutikal.

Teknik untuk Memantau Integriti Sel E. coli

Sitosi Fasa: Menggunakan pewarna fluoresen untuk membezakan keadaan sel, seperti iodida propidium untuk mengesan kelangsungan hidup sel dan SYTO9 untuk menilai kebolehmelesapan OM. Walau bagaimanapun, ia memerlukan kos tinggi untuk penjenis dan operasi yang kompleks.

Kaedah Kolorimetrik: Mencerminkan lisis sel dengan mengesan kandungan DNA, aktiviti enzim, dll., dalam supernatan, seperti menggunakan set reagen PicoGreen dan ujian aktiviti fosfatase alkaline. Kaedah ini bagaimanapun, adalah merepotkan dan memerlukan bahan kimia yang mahal.

Kromatografi Cecair Berprestasi Tinggi: Digunakan untuk pengesanan luar tal produk ekstraseluler untuk menilai kebocoran OM. Namun, automatikasinya adalah kompleks dan masa analisisnya panjang.

Teknik Spektroskopi Getaran: Seperti spektroskopi inframerah dekat dan inframerah tengah, yang mempunyai aplikasi potensial tetapi memerlukan penyelesaian gangguan spektral dan cabaran analisis data.

Spektroskopi Dielektrik: Menilai integriti membran dengan mengukur impedans suspensi sel, membolehkan pemantauan dalam talian secara real-time. Walau bagaimanapun, ia rentan kepada gangguan dan penyesuaian sulit dilakukan.

Biosensor: Boleh mengesan sebatian yang bocor daripada dalam sel atau periplasm, tetapi menghadapi isu seperti kesukaran regenerasi sensor.

Pengukuran Viskositi dan Kepadatan: Murah dan cepat dalam analisis, tetapi kekurangan selektiviti dan memerlukan pertimbangan data pelbagai batch untuk penilaian.

Faktor yang Mempengaruhi Integriti Selular

Kejuruteraan Strain: Mengubah integriti OM melalui kejuruteraan genetik, seperti memutasi gen lipoprotein, tetapi boleh mempengaruhi pertumbuhan strain.

Tekanan Teraruh: Penyatahan berlebihan protein rekombinan menyebabkan beban metabolik, mempengaruhi fisiologi sel. Oleh itu, pengawalan yang wajar terhadap tahap penyatahan adalah perlu.

Kadar Pemberian Substrat: Kedua-dua kadar pemberian yang terlalu tinggi dan rendah mempengaruhi lisis sel dan integriti OM.

Suhu dan Aerasi: Suhu tinggi dan ketersediaan oksigen yang rendah meningkatkan tekanan ekspresi dan kebocoran OM masing-masing, tetapi kesan spesifik berbeza-beza.

Osmotik: Digunakan untuk melepaskan protein periplasmik tetapi merosakkan kelangsungan hidup sel, membatalkan penggunaannya.

Kesimpulan Penyelidikan masa depan perlu menyelami lebih dalam mekanisme dan keadaan pembaikan membran untuk mengawal dengan tepat integriti membran sel. Mengoptimumkan kaedah pengawasan, dan menganalisis faktor-faktor yang mempengaruhi dijangka akan meningkatkan kualiti produk, dengan itu mendorong perkembangan industri bi farmaseutikal.

Kami juga aktif mencari rakan global institusi atau individu. Kami menawarkan ganti rugi paling bersaing dalam industri. Jika anda ada sebarang soalan, sila rasa percuma untuk menghubungi kami di [email protected]