Teknik Penyambungan Inovatif untuk Sintesis Gen Skala Besar

Teknologi perakitan untuk sintesis fragmen DNA besar dari awal adalah batu asas bagi sintesis gen, merangkumi kaedah seperti BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson assembly, CPEC, dan Overlap PCR. Disebabkan keterbatasan teknologi semasa dalam menyintesis DNA dengan tepat dalam satu langkah, adalah perlu untuk menggabungkan teknik perakitan in vitro dan in vivo untuk merakamkan fragmen oligonukleotida yang disintesis secara segmen kepada fragmen DNA panjang.

Teknik perakitan in vitro

Mereka diklasifikasikan kepada pelbagai kaedah berdasarkan saiz pecahan dan ciri-ciri urutan, dengan keperluan sepunya untuk menggunakan enzim alat. Overlap PCR, yang berasaskan kepada kaedah DNA polimerase, adalah mudah dan pantas dalam operasi. Kaedah BioBrick dan BglBrick, yang bergantung kepada isoschizomer, membolehkan penyambungan piawai, walaupun kaedah BioBrick tidak sesuai untuk protein fusi. Kaedah kloning Golden Gate, yang berasaskan kepada enzim pemotong had IIS, membolehkan penyambungan tanpa jeda yang cekap bagi beberapa pecahan. Kaedah perakitan Gibson, yang menggunakan gabungan beberapa enzim alat, membolehkan penyambungan tanpa jeda dengan saiz pecahan hingga ratusan kb. Reka bentuk piawai komponen DNA meningkatkan kadar penggunaan pecahan sedia ada.

Teknik penyambungan in vivo

Walaupun di luar badan saiz pecahan yang disambungkan boleh mencapai ratusan kb, hasilnya sering kali tidak mencukupi, memerlukan pendedahan menggunakan organisme seperti Escherichia coli. Dalam menyusun pecahan yang melebihi 20 kb, sistem rekombinan dalam organisma sering digunakan, termasuk Bacillus subtilis, ragi, dan bakteria yang direkayasa. Ragi, sebagai hos yang biasa digunakan, telah dikenali kerana keupayaannya dalam rekombinasi homolog yang cekap selama bertahun-tahun. Ia boleh digunakan untuk menyusun kromosom buatan sehingga beberapa megabase (Mb) dalam panjang. Selain itu, Saccharomyces cerevisiae memperlihatkan toleransi luar biasa terhadap panjang kromosom, memberikan asas teori untuk menggunakan ragi dalam membina kromosom ultra-panjang dalam organisma yang lebih tinggi.

Aplikasi

Yaohai Bio-Pharma terutamanya menggunakan dua kaedah perakitan untuk sintesis gen: perakitan ligase dan perakitan DNA polimerase. Kaedah perakitan ligase menghubungkan kepingan oligonukleotida 5'-fosforilated yang tindih dan hibrida kepada DNA dua rantai menggunakan ligase DNA. Kaedah perakitan polimerase menggunakan polimerase DNA untuk memanjangkan kepingan oligonukleotida yang tindih melalui hibridisasi, mendapatkan campuran panjang yang berbeza-beza, dan akhirnya memperlebar pecahan penuh yang berjaya dirakit sepenuhnya menggunakan penanda. Yaohai boleh membantu pelanggan memenuhi keperluan spesifik dalam sintesis gen.

Kami juga aktif mencari rakan global institusi atau perorangan. Kami menawarkan ganti rugi paling kompetitif dalam industri ini. Jika anda ada sebarang soalan, sila rasa percuma untuk menghubungi kami: [email protected]