Teknik Perhimpunan Inovatif untuk Sintesis Gen Berskala Besar

Teknologi pemasangan untuk mensintesis serpihan DNA yang besar dari awal adalah asas kepada sintesis gen, merangkumi kaedah seperti BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, pemasangan Gibson, CPEC dan Overlap PCR. Disebabkan oleh keterbatasan teknologi semasa dalam mensintesis DNA panjang gen secara tepat dalam satu langkah, adalah perlu untuk menggabungkan teknik pemasangan in vitro dan in vivo untuk memasang serpihan oligonukleotida yang disintesis dalam segmen menjadi serpihan DNA yang panjang.

Teknik pemasangan in vitro

Ia dikelaskan kepada pelbagai kaedah berdasarkan saiz serpihan dan ciri jujukan, dengan keperluan biasa untuk menggunakan enzim alat. PCR bertindih, berdasarkan kaedah polimerase DNA, adalah mudah dan pantas dalam operasi. Kaedah BioBrick dan BglBrick, yang bergantung pada isoschizomer, membolehkan pemasangan standard, walaupun dengan kaedah BioBrick tidak sesuai untuk protein gabungan. Kaedah pengklonan Golden Gate, berdasarkan enzim sekatan jenis IIS, membolehkan pengikatan lancar berbilang serpihan yang cekap. Kaedah pemasangan Gibson, yang menggunakan gabungan pelbagai enzim alat, membolehkan pengikatan lancar dengan saiz serpihan mencecah beberapa ratus kb. Reka bentuk piawai komponen DNA meningkatkan kadar penggunaan serpihan sedia ada.

Teknik pemasangan in vivo

Walaupun vitro serpihan yang dipasang boleh mencapai saiz beberapa ratus kb, hasil selalunya tidak mencukupi, memerlukan penguatan menggunakan organisma seperti Escherichia coli. Dalam memasang serpihan melebihi 20 kb, sistem rekombinan dalam organisma sering digunakan, termasuk Bacillus subtilis, yis, dan bakteria kejuruteraan. Yis, sebagai perumah yang biasa digunakan, telah diiktiraf untuk keupayaan penggabungan semula homolog yang cekap selama bertahun-tahun. Ia boleh digunakan untuk memasang kromosom tiruan sehingga beberapa megabases (Mb) panjangnya. Selain itu, Saccharomyces cerevisiae mempamerkan toleransi yang luar biasa untuk panjang kromosom, menyediakan asas teori untuk menggunakan yis untuk membina kromosom ultra-panjang dalam organisma yang lebih tinggi.

Aplikasi

Yaohai Bio-Pharma terutamanya menggunakan dua kaedah pemasangan untuk sintesis gen: pemasangan ligase dan pemasangan polimerase DNA. Kaedah pemasangan ligase menghubungkan serpihan oligonukleotida berfosforilasi 5' yang bertindih dan terhibrid ke dalam DNA untai dua menggunakan ligase DNA. Kaedah pemasangan polimerase menggunakan polimerase DNA untuk memanjangkan serpihan oligonukleotida yang bertindih melalui hibridisasi, mendapatkan campuran panjang yang berbeza, dan akhirnya menguatkan serpihan panjang penuh yang berjaya dipasang menggunakan primer. Yaohai boleh membantu pelanggan memenuhi keperluan khusus dalam sintesis gen.

Kami juga sedang giat mencari rakan kongsi global institusi atau individu. Kami menawarkan pampasan yang paling kompetitif dalam industri. Jika anda mempunyai sebarang pertanyaan, sila hubungi kami: [email protected]