Memanfaatkan Kuasa Strategi Penapaian Kumpulan Fed Malaysia

Pichia pastoris digunakan secara meluas dalam penghasilan pelbagai protein heterolog. Teknologi Penapaian Ketumpatan Sel Tinggi (HCDF), yang dilaksanakan melalui pemberian Fed-Batch, telah berjaya mencapai pengeluaran berskala besar biofarmaseutikal dan enzim perindustrian. Dalam media yang dikawal dengan tepat, penggunaan teknologi HCDF boleh mendapatkan protein rekombinan hasil tinggi, aktiviti tinggi dan kos efektif.

Penyelidikan terkini menunjukkan bahawa melalui strategi HCDF, usaha sedang dibuat untuk meningkatkan pengeluaran dan aktiviti protein heterolog dalam Pichia pastoris. Teknologi HCDF membolehkan pencapaian gugusan sel peringkat tinggi dengan mudah dalam media yang ditentukan, dengan itu membolehkan pemerolehan protein rekombinan yang banyak dengan aktiviti yang dipertingkatkan dan mengurangkan kos melalui HCDF. Walau bagaimanapun, memilih strategi HCDF yang sesuai untuk mengoptimumkan ekspresi peringkat tinggi protein tertentu dalam Pichia pastoris kekal sebagai cabaran.

Penapaian Ketumpatan Sel Tinggi (HCDF)

Pichia pastoris cemerlang dalam pengeluaran protein heterolog, diutamakan untuk HCDF dalam bioreaktor automatik. HCDF mempunyai 3 peringkat: kumpulan gliserol, penyusuan, dan induksi metanol. Yaohai Bio-Pharma mempunyai pengalaman lebih sedekad dalam penapaian mikrob dan telah melaksanakan lebih 400 projek. Syarikat itu memiliki kepakaran yang luas dan teknologi yang dibangunkan dengan baik, membolehkannya menggunakan pelbagai strategi HCDF untuk meningkatkan kecekapan pengeluaran protein.

Metanol berfungsi sebagai kedua-dua inducer AOX1 dan sumber karbon, tetapi kepekatannya mesti dikawal untuk mengelakkan ketoksikan. Menilai strategi pemakanan metanol yang berbeza adalah penting untuk mengoptimumkan pertumbuhan Pichia pastoris dan ekspresi protein

Strategi induksi metanol

Dalam strategi induksi metanol HCDF kumpulan makan, strategi induksi berasaskan negeri merangkumi satu set metodologi kawalan yang mengawal selia penambahan metanol tambahan melalui kawalan dalam talian/luar talian atau ke hadapan/terbalik. Antara strategi induksi statistik, yang utama termasuk μ-stat, Oksigen Terlarut (DO)-stat, metanol-stat, dan biojisim-stat.

1.1 μ-stat

Strategi μ-stat memastikan biojisim stabil dengan mengawal μ, membantu kebolehulangan dan mengkaji kesan μ pada ekspresi protein. Walau bagaimanapun, ia tidak mempunyai kawalan metanol dan DO langsung, berisiko terkumpul dan penjanaan ROS.

1.2 DO-stat

Strategi DO-stat secara tidak langsung mengawal suapan metanol dengan mengawal oksigen terlarut untuk mengekalkan pengoksigenan, tetapi ia tidak menetapkan kepekatan metanol dan kadar pertumbuhan, yang boleh menjejaskan kajian ekspresi protein. Oksigenasi menimbulkan cabaran dalam penapaian aerobik, dan sementara suplemen oksigen tulen boleh mahal dan toksik, peningkatan tekanan adalah pendekatan yang lebih menjimatkan yang juga boleh meningkatkan aktiviti protein.

1.3 Methanol-stat

Kawalan kepekatan metanol yang tidak mencukupi menimbulkan had kepada kedua-dua strategi μ-stat dan DO-stat. Strategi statistik metanol, yang beroperasi dalam mod hidup/mati, terdedah kepada turun naik dan kurang ketepatan. Sebaliknya, pengawal PID menawarkan peraturan kepekatan metanol yang lebih tepat, meningkatkan keberkesanan penapaian keseluruhan.

1.4 Biojisim-stat

Strategi statistik biojisim mentakrifkan hubungan antara pemberian biojisim dan metanol, mengoptimumkan kadar penyusuan metanol untuk meningkatkan hasil protein. Pemantauan dalam talian biojisim adalah lebih praktikal, dengan sitometri aliran menjadi kaedah pilihan. Pada skala 1000L, mengoptimumkan kadar penyusuan metanol dengan ketara meningkatkan aktiviti enzim, hasil dan produktiviti, mengatasi prestasi penapaian kelalang.

Strategi penyusuan bersama

Gliserol, sebagai perencat promoter AOX1, mesti dimakan sepenuhnya sebelum induksi metanol untuk mengelak daripada menyekat pengeluaran protein. Substrat bersama boleh meningkatkan aktiviti enzim tetapi lebihan gliserol boleh membahayakan pertumbuhan dan ekspresi. Sorbitol, asid askorbik, manitol, dan lain-lain boleh menggantikan gliserol, mengurangkan masa proteolisis dan penanaman, dan meningkatkan ekspresi protein.

Bank terikan memerlukan penggunaan kaedah pemeliharaan dan penempatan yang sesuai dalam persekitaran yang sesuai untuk mengekalkan kestabilan ciri terikan. Yaohai Bio-Pharma boleh memenuhi keperluan untuk pemeliharaan stok gliserol (melalui penyejuk beku suhu ultra rendah atau nitrogen cecair) dan pengawetan pengeringan beku yis dan E. coli.

Strategi yang disebabkan oleh sekatan

Dalam Pichia pastoris, keadaan sekatan seperti DO rendah, kepekatan metanol., dan had oksigen meningkatkan ekspresi protein rekombinan. Keadaan terhad oksigen mengaktifkan promoter AOX1 melalui pengumpulan metanol, meningkatkan pengeluaran protein sambil mengurangkan haba. Induksi suhu rendah meningkatkan hasil, aktiviti, kestabilan dan daya maju sel tetapi menambah kos penyejukan. Had pH dan nitrogen juga membantu ekspresi, memerlukan berhati-hati untuk mengelakkan masalah operasi. Had nitrogen terutamanya meningkatkan produktiviti protein tertentu.

Yaohai Bio-Pharma juga sedang giat mencari rakan kongsi global institusi atau individu dan menawarkan pampasan paling kompetitif dalam industri. Jika anda mempunyai sebarang pertanyaan, sila hubungi kami: [email protected]