Menggali Kuasa Strategi Penapaian Fed-batch

Pichia pastoris secara meluas digunakan dalam pengeluaran pelbagai protein heterolog. Teknologi Penapaian Ketumpatan Sel Tinggi (HCDF), dilaksanakan melalui pemberian Fed-Batch, telah berjaya mencapai pengeluaran skala besar bagi bi farmaseutikal dan enzim perindustrian. Dalam media yang dikawal dengan tepat, penggunaan teknologi HCDF boleh mendapatkan protein rekombinan dengan hasil tinggi, keaktifan tinggi, dan kos yang efektif.

Kajian terkini menunjukkan bahawa melalui strategi HCDF, usaha sedang dibuat untuk meningkatkan pengeluaran dan keaktifan protein heterolog dalam Pichia pastoris. Teknologi HCDF membolehkan pencapaian mudah kumpulan sel pada tahap tinggi dalam media yang ditakrifkan, dengan itu membolehkan pendapat protein rekombinan yang melimpah dengan keaktifan diperbaiki dan kos yang dikurangkan melalui HCDF. Walau bagaimanapun, memilih strategi HCDF yang sesuai untuk mengoptimumkan pengungkapan tahap tinggi protein tertentu dalam Pichia pastoris masih menjadi satu cabaran.

Penapaian Ketumpatan Sel Tinggi (HCDF)

Pichia pastoris cemerlang dalam pengeluaran protein heterolog, disenangi untuk HCDF dalam bioreaktor automatik. HCDF mempunyai 3 peringkat: pemberian gliserol, penyusuan, dan induksi metanol. Yaohai Bio-Pharma mempunyai lebih daripada satu dekad pengalaman dalam penapisan mikrob dan telah melayani lebih daripada 400 projek. Syarikat itu memiliki kecekapan yang luas dan teknologi yang terkembang baik, membolehkannya menggunakan pelbagai strategi HCDF untuk meningkatkan kecekapan pengeluaran protein.

Metanol berkhidmat sebagai pencetus AOX1 dan juga sumber karbon, tetapi kandungannya mesti dikawal untuk mengelakkan toksisiti. Menilai pelbagai strategi penyusuan metanol adalah penting untuk mengoptimumkan pertumbuhan Pichia pastoris dan ungkapan protein.

Strategi induksi metanol

Dalam strategi induksi metanol HCDF fed-batch, strategi induksi berdasarkan keadaan meliputi satu set metodologi kawalan yang mengatur penambahan tambahan metanol melalui kawalan dalam talian/luar talian atau kawalan hadapan/belakang. Di antara strategi statistik induksi, yang utama termasuk μ-stat, Dissolved Oxygen (DO)-stat, metanol-stat, dan biomass-stat.

1.1 μ-stat

strategi μ-stat mengekalkan biomassa dengan mengawal μ, membantu kebolehturunan, dan mengkaji kesan μ terhadap ungkapan protein. Walau bagaimanapun, ia tidak mempunyai kawalan langsung terhadap metanol dan DO, membahayakan akumulasi dan pengeluaran ROS.

1.2 DO-stat

Strategi DO-stat mengawal pemberian metanol secara tidak langsung dengan mengawal oksigen terlarut untuk mengekalkan oksigenasi, tetapi ia tidak menetapkan kepekatan metanol dan kadar pertumbuhan, yang boleh mempengaruhi kajian ungkapan protein. Oksigenasi membawa cabaran dalam pembiakan aerob, dan walaupun penambahan oksigen murni boleh menjadi mahal dan toksik, peningkatan tekanan adalah pendekatan yang lebih ekonomi yang juga boleh meningkatkan aktiviti protein.

1.3 Methanol-stat

Kawalan yang tidak mencukupi terhadap kepekatan metanol memberi had kepada kedua-dua strategi μ-stat dan DO-stat. Strategi statistik metanol, yang beroperasi dalam mod on/off, rentan kepada keluaran dan kekurangan ketepatan. Sebaliknya, pengawal PID menawarkan pengawalan yang lebih tepat terhadap kepekatan metanol, meningkatkan keberkesanan pembiakan keseluruhan.

1.4 Biomass-stat

Strategi biomass-stat menentukan hubungan antara biomassa dan pemberian metanol, mengoptimumkan kadar pemberian metanol untuk meningkatkan hasil protein. Pemantauan生物质 secara dalam talian adalah lebih praktikal, dengan siber aliran menjadi kaedah yang dipilih. Pada skala 1000L, pengoptimuman kadar pemberian metanol secara signifikan meningkatkan aktiviti enzim, hasil, dan produktiviti, melampaui penapaian dalam bikarbor.

Strategi pemberian bersama

Glicerol, sebagai penghalang promotor AOX1, mesti sepenuhnya dikonsumsi sebelum induksi metanol untuk mengelakkan penekanan pengeluaran protein. Substrat bersama boleh meningkatkan aktiviti enzim tetapi glicerol berlebihan boleh membahayakan pertumbuhan dan ungkapan. Sorbitol, asid askorbat, manitol, dan lain-lain boleh menggantikan glicerol, mengurangkan proteolisis dan masa budidaya, serta meningkatkan ungkapan protein.

Bank strain memerlukan penggunaan kaedah pemeliharaan yang sesuai dan penempatan dalam persekitaran yang sesuai untuk mengekalkan kestabilan ciri-ciri strain. Yaohai Bio-Pharma boleh memenuhi keperluan untuk pemeliharaan stok gliserol (melalui peti sejuk suhu rendah sangat atau nitrogen cecair) dan pemeliharaan pengeringan beku bagi ragi dan E. coli.

Strategi yang disebabkan oleh had

Dalam Pichia pastoris, syarat-syarat had seperti DO rendah, konsentrasi metanol, dan had oksigen meningkatkan ungkapan protein rekombinan. Syarat-syarat terhad oksigen mengaktifkan promotor AOX1 melalui akumulasi metanol, meningkatkan hasil protein sambil mengurangkan haba. Pengaktifan pada suhu rendah meningkatkan hasil, aktiviti, kestabilan, dan kelangsungan hidup sel tetapi menambah kos penyejukan. pH dan had nitrogen juga membantu ungkapan, memerlukan perhatian untuk mengelakkan isu operasi. Had nitrogen secara ketara meningkatkan produktiviti protein spesifik.

Yaohai Bio-Pharma juga aktif mencari rakan global, sama ada institusi atau perorangan, dan menawarkan ganti rugi paling kompetitif dalam industri. Jika anda mempunyai sebarang soalan, sila hubungi kami: BD@yaohaibio.cn