Што се однесува до масовното производство на mRNA, ин витро транскрипцијата (IVT) е поефикасна и позрела метода. Реакцијата IVT усвојува линеаризирана плазмидна ДНК која го содржи промоторот Т7 како шаблон, а mRNA се синтетизира со нуклеозидни трифосфати (NTPs) како супстрати во присуство на T7 RNA полимераза.
Нуклеотидната модификација е пробив во истражувањето на мРНК, каде што немодифицираните мРНК молекули се препознаваат од интрацелуларните РНК сензори за да се активира вродениот имунитет. За разгледување на имуногеноста на mRNA in vivo и ефикасноста на транслацијата, процесот на IVT обично користи одредени видови на модифицирани NTP, а вообичаени модифицирани нуклеотиди се псеудуридин (Ψ), N1-метил-псевдуридин (N1Ψ) и 5-метилцитозин (5 mC).
Ин витро процес на транскрипција на mRNA
Дијаграм на реакција на ин витро транскрипција (IVT).
Детали за услуги
Факултативна услуга | Детали за услугата | Период на испорака (работен ден) |
Ин витро транскрипција (IVT) | IVT, ин витро транскрипција | 1 |
| Нуклеотидни модификации (Ψ/N1Ψ/5mC, итн.) |
| Отстранување на ДНК шаблон (DNase I) |
Оптимизација на IVT состојба - опционално | Дизајн и оптимизација на компонентите на IVT реакција | 2-5 |
Нашите карактеристики
- Диверзифицирани стратегии за модификација на нуклеотиди
Подобрете ја стабилноста на mRNA и протеинската експресија in vivo.
- Ригорозен тест дизајн и оптимизација
Може да се постигне подготовка на mRNA фрагмент до 10 kb.
Со оптимизирање на условите за реакција на IVT, брзината на транскрипција е до 1:200.
Строгата контрола на RNase преку експериментална средина и потрошен материјал може ефикасно да ја спречи деградацијата на mRNA.
Студија на случај
Тековниот систем за IVT реакција е грубо оптимизиран за синтетички системи со должина од околу 100 nt, а не за mRNA со произволна должина. Колку е подолга секвенцата на мРНК, толку е потешко да се транскрибира и е поподложна на деградација.
Со цел да се подготват прилагодени секвенци на mRNA со должина од околу 10 kb, Yaohai Bio-Pharma успешно подготви висококвалитетни примероци со висок сооднос на транскрипција од 1:135 и доби 135 μg првично прочистени производи на mRNA по 1 μg линеаризирана плазмида. беше транскрибиран ин витро преку ригорозен експериментален дизајн, континуирана оптимизација на условите за реакција и строга контрола на RNase.
Идентификување на мРНК (електрофореза со гел агароза)
MK
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
UR
BN
