Aukštos kokybės plazmidžių ekstrahavimo paslapčių atskleidimas

Plazmidžių ekstrahavimas yra labai svarbus tyrėjams. Kaip genų vektoriai, plazmidės yra gyvybiškai svarbios atliekant vakcinų tyrimus ir genų terapiją, kur svarbu kokybė. Pagrindiniai kokybės veiksniai apima superspiralinę proporciją ir endotoksinų kiekį. Taisyklės skiriasi: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, su <5% linijine/atviro žiedo DNR. Klientai dažnai teikia pirmenybę ≥95 % superspiraliniam sluoksniui. Endotoksinų lygiai yra šie: moksliniai tyrimai (>50 EU/µg), transfekcija (<50 EU/µg) ir be endotoksinų (<0.1 EU/µg).

Superspiralinė plazmidinė DNR

Escherichia coli plazmidės apima superspiralinę (SC), atvirą žiedinę (OC) ir linijinę (L) DNR. Didelė SC dalis padidina transfekcijos efektyvumą ir ekspresiją. Pavyzdžiui, 85.45 % SC plazmidės transfekcija yra 2.5 karto didesnė, o 93.28 % SC plazmidės HGF ekspresija yra 1.8 karto didesnė, o tai patvirtina SC DNR pranašumą.

Atvira žiedinė DNR: nutrūkus vienai dvigrandės DNR grandinei, superspiralinė struktūra tampa laisva ir susidaro atvira apvali, didesnio tūrio plazmidė, kuri lėčiausiai migruoja elektroforezės metu ir yra viršuje.

Linijinė DNR: nutrūkus abiem plazmidinės DNR grandinėms, susidaro linijinė struktūra, kurios tūris yra santykinai mažesnis, migruojantis greičiau nei atvirojo žiedo DNR, bet lėčiau nei superspiralinė DNR, esanti antroje vietoje.

Superspiralinė DNR: dvi spiralės susipina, susisukdamos į superspiralinę struktūrą, pagrįstą DNR spirale. Jis turi mažiausią tūrį ir greičiausiai migruoja elektroforezės metu, esantis apačioje.

Superspiralinės proporcijos kiekybinė analizė

Laboratorijos naudoja agarozės gelio elektroforezę (AGE) ir Gel-Pro Analyzer, kad įvertintų superspiralinę proporciją pagal elektroforezės vaizdus. Viename paveikslėlyje parodyta 97.539% SC DNR, o kitame - 63.833% SC ir 36.167% OC DNR (linijinė DNR nematoma).

Endotoksino paslaptis plazmidėse

Endotoksinas yra išorinio gramneigiamų bakterijų ląstelės sienelės sluoksnio komponentas, išsiskiriantis po bakterijų mirties ar lizės, turintis toksinio lipopolisacharido A. Ekstrahuojant plazmidę endotoksinas patenka į lizės tirpalą, paveikdamas transfekcijos efektyvumą ir sukeldamas nespecifinį imuninį atsaką, todėl klaidingai teigiami rezultatai eksperimentuose.

Kiekybinė ir kokybinė endotoksino analizė

Limulus amebocyte lysate (LAL) testas aptinka endotoksiną per agliutinaciją su 2-keto-3-deoksioktono rūgštimi (KDO) lipopolisacharide (LPS). Tai kokybinė ir pusiau kiekybinė, rodanti endotoksinų buvimą dėl koaguliacijos arba spalvos pasikeitimo maišant su mėginiais.

Yaohai Bio-Pharma siūlo be endotoksinų susuktas plazmides. Užsakomosios paslaugos Yaohai padidina transfekcijos ir išraiškos efektyvumą. Pristatytose plazmidėse SC dalis yra ≥95% (vidutiniškai 85%±10%), o endotoksinų kiekis yra ≤0.1, ≤0.01 arba ≤0.005 EU/μg.

Taip pat aktyviai ieškome institucinių ar individualių pasaulinių partnerių. Mes siūlome konkurencingiausią atlyginimą pramonėje. Jei turite klausimų, nedvejodami susisiekite su mumis: [email protected]