Atskleidžiant aukštos kokybės plazmidų ištraukos slaptus

Plazmidų ištraukimas yra svarbus tyrimams. Kaip genų vektoriai, plazmidai yra pagrindiniai vakcinos tyrimuose ir genie terapijoje, kur kokybė turi didelę reikšmę. Pagrindinės kokybės veiksmai apima superploto procentą ir endotoxinų turinį. Reglamentai skiriasi: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, su mažiau nei 5% linijine ar atvira cikline DNA. Klientai dažnai nori ≥95% superploto. Endotoxinų lygiai yra: tyrimams (>50 EU/µg), transfekcijai (<50 EU/µg) ir be endotoxinų (<0.1 EU/µg).

Superploto plazmidinė DNA

Escherichia coli plazmidai apima superploto (SC), atvirai ciklinę (OC) ir linijinę (L) DNA. Aukštas SC procentas padidina transfekcijos efektyvumą ir išraišką. Pavyzdžiui, 85,45% SC plazmido transfekcija yra 2,5 kartus aukštesnė, o 93,28% SC plazmido HGF išraiška yra 1,8 kartus didesnė, patvirtinančios SC DNA pranašumą.

Atvira apskritiminė DNA: Kai vienas iš dviejų grandinėlių dvejopos lizdės DNA pertraukiamas, superpirminis struktūros stiebusi, formuojant atvirą apskritiminę plazmidą su didesniu tūriu, kuris per elektroforezę migruoja lėgiausiai ir yra padėtas viršuje.

Linijinė DNA: Kai abu plazmido DNA smugiai pertraukiami, formuojasi linijinė struktūra, turinti mažesnį tūrį, kuris migruoja greičiau nei atvira apskritiminė DNA, bet lėčiau nei superpirminė DNA, padėta antroje vietovėje.

Superpirmingintai DNA: Dvi helikos sija, sukdamios superpirmingintąją struktūrą, pagrįstą DNA heliką. Ji turi mažiausią tūrį ir per elektroforezę migruoja greičiau, padėta apačioje.

Superpirminginto dydžio kiekybinis analizas

Laboratorijos naudoja agarovo gelelektroforezės (AGE) ir Gel-Pro Analyzer metodus siekdamos įvertinti superpirminginto procentinį sudėtį per elektroforezės vaizdus. Viename vaizde matomas 97,539 % SC DNA, o kitame – 63,833 % SC ir 36,167 % OC DNA (linijinė DNA nebegyva).

Plazmidų endotoxinų paslaptis

Endotoxinas yra Gram-negatyvių bakterijų ląstelės sienos išorinio sluoksnio dalis, išleidžiama po bakterijų mirties ar lizėjimo, kurioje yra toksiškas lipopolisacharidas A. Plazmido ištraukimo metu endotoxinos patekia į lizėjimo spalvą, paveikdamas transfekcijos efektyvumą ir sukeldamas nespecifinius imuninius atsakymus, kuriuos galima priskirti netiksliai gautoms eksperimentiniams rezultatams.

Endotoxinų kiekybinis ir kokybinis analizas

Limulo amebocitų lizato (LAL) bandymas aptinka endotoxinas per susipynimą su 2-keto-3-deoksioktoniu rūgšte (KDO) iš lipopolisacharido (LPS). Jis yra kokybinis ir pusiau kiekybinis, rodantis endotoxinų buklę per susirinkimą ar spalvos pokytį, kai jis sumaišomas su imitu.

Yaohai Bio-Pharma siūlo endotoxinų nemokinančius superpliztuotus plazmidus. Išimtinai Yaohai paslaugomis padidinamas transfekcijos ir išraiškos efektyvumas. Pateikiami plazmidai turi ≥95% SC proporčių (vidutiniškai 85%±10%) ir endotoxinų lygius ≤0.1, ≤0.01 arba ≤0.005 EU/μg.

Be to, aktyviai ieškome globalių institucinių ar asmeninių partnerių. Siūlome geresnį nei konkurentai atlyginimą. Jei turite bet kokios problemos, prašome ją kuo greičiau su mumis spręsti: [email protected]