Rekombinantinių baltymų gamyba: sukurtos E. coli padermės

Escherichia coli (E. coli) atliko svarbų vaidmenį gaminant rekombinantinius baltymus biofarmacijos pramonėje ir yra pirmasis ekspresijos vektorius gaminant biologinius vaistus. Be kitų privalumų, E. coli gali pasigirti greitu augimu, patogiu genetiniu manipuliavimu ir greita rekombinantinių baltymų sinteze. Dėl didelių modifikacijų E. coli tapo optimaliu baltymų ekspresijos pasirinkimu, todėl buvo sukurtos įvairios modifikuotos E. coli padermės.

„Yaohai Bio-Pharma“ specializuojasi teikdama „vieno langelio“ užsakomųjų paslaugų, skirtų fermentacijai, gryninimui, formavimo procesų kūrimui ir biofarmacijos serijos gamybai, naudojant E. coli ekspresijos sistemas. Atsižvelgdami į didelę Yaohai patirtį, apibendriname, kad rekombinantinių baltymų gamybai naudojamos keturios įprastos E. coli padermės ir jų savybės.

BL 21 padermė

BL21 padermė, kilusi iš E. coli B linijos, neturi Lon proteazės ir išorinės membranos proteazės OmpT. Lon proteazė pirmiausia skaido egzogeninius baltymus, o OmpT daugiausia skaido ekstraląstelinės matricos baltymus. Šių dviejų pagrindinių proteazių nebuvimas gali veiksmingai užkirsti kelią rekombinantinių baltymų skilimui.

Origami padermė

Origami padermė, E. coli K-12 darinys, turi tioredoksino reduktazės ir glutationo reduktazės mutacijas, kurios palengvina tinkamai sulankstytų baltymų, turinčių disulfidinių jungčių, susidarymą ir padidina baltymų tirpumą. Origami padermė, įskaitant Origami, Origami 2 ir Origami B, yra tinkama aktyvių baltymų, turinčių disulfidinių jungčių, ekspresijai.

SHuffle deformacija

SHuffle padermė konstitutyviai išreiškia disulfidinės jungties izomerazę DsbC citoplazmoje, skatindama teisingų disulfidinių jungčių susidarymą oksiduotuose baltymuose. Jis taip pat tarnauja kaip molekulinis chaperonas baltymų lankstymui, padedantis formuoti teisingą konformaciją.

Rosetta padermė

Rosetta padermė E. coli papildo retus kodonus atitinkančiomis tRNR, siekdama pagerinti egzogeninių genų, ypač eukariotinių genų, ekspresijos lygį prokariotinėse sistemose. Gautas iš BL21 ir turintis chloramfenikoliui atsparią pRARE plazmidę, jis papildo šešias tRNR, atitinkančias retus kodonus (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC ir GGA), kurių iš pradžių nebuvo E. coli, užtikrinant „universalesnę“ baltymų ekspresiją.

Išvada

Trys pagrindiniai sėkmingo rekombinantinių baltymų gamybos veiksniai yra šeimininkas, vektorius ir auginimo sąlygos. Remiantis rekombinantinio baltymo fizikinių ir cheminių savybių supratimu, unikaliais kiekvienos padermės pranašumais ir specifiniais eksperimento poreikiais, reikėtų parinkti tinkamiausią šeimininką. Be to, norint sustiprinti baltymų ekspresiją, reikia optimizuoti tokius veiksnius kaip plazmidiniai vektoriai, temperatūra ir induktoriai.

Yaohai Bio-Pharma taip pat aktyviai ieško institucinių ar atskirų pasaulinių partnerių ir siūlo konkurencingiausią atlygį pramonėje. Jei turite klausimų, nedvejodami susisiekite su mumis: [email protected]