E. coli ląstelių vientisumo optimizavimas Biopharma gamybai

Biofarmacijos srityje Escherichia coli (E. coli) atlieka gyvybiškai svarbų vaidmenį kaip rekombinantinių baltymų ekspresijos šeimininkė. E. coli ląstelių vientisumas yra labai svarbus baltymų derliui, kokybei ir gamybos sąnaudoms. Šis vientisumas visų pirma apima vidinės membranos (IM) ir išorinės membranos (OM) struktūrą ir funkciją.

Yaohai Bio-Pharma turi 15 metų E. coli fermentaciją ir rekombinantinio baltymo ekspresiją. Mes naudojame įvairias strategijas, kad išlaikytume aukštą E. coli ląstelių vientisumą, plazmidės išeiga viršija 1 g/l per 30 valandų auginimo ciklą. Remdamasi didele mikrobų ekspresijos patirtimi, Yaohai Bio-Pharma apibendrino keletą veiksmingų strategijų, skirtų stebėti ir pagerinti E. coli ląstelių vientisumą biofarmacinės gamybos metu.

E. coli ląstelių vientisumo stebėjimo metodai

Srauto citometrija: Naudojami fluorescenciniai dažai, skirti atskirti ląstelių būsenas, pvz., propidžio jodidas ląstelių gyvybingumui nustatyti ir SYTO9 OM pralaidumui įvertinti. Tačiau tam reikia didelių dėmių ir sudėtingų operacijų išlaidų.

Kolorimetriniai metodai: atspindėkite ląstelių lizę supernatante nustatydami DNR kiekį, fermentų aktyvumą ir kt., pvz., naudodami PicoGreen reagentų rinkinį ir šarminės fosfatazės aktyvumo tyrimus. Tačiau šie metodai yra sudėtingi ir reikalauja brangių reagentų.

Aukštos kokybės skysčių chromatografija: naudojama neprisijungus aptikti tarpląstelinio produkto koncentracijas, siekiant įvertinti OM nuotėkį. Tačiau jo automatizavimas yra sudėtingas, o analizės laikas ilgas.

Vibracinės spektroskopijos metodai: pavyzdžiui, artimųjų ir vidutinių infraraudonųjų spindulių spektroskopija, kuri gali būti pritaikyta, tačiau reikalaujanti įveikti spektrinius trukdžius ir duomenų analizės iššūkius.

Dielektrinė spektroskopija: įvertina membranos vientisumą, matuojant ląstelių suspensijų varžą, leidžiančią stebėti realiuoju laiku internete. Tačiau jis yra jautrus trikdžiams ir sunku kalibruoti.

Biosensoriai: gali aptikti junginius, nutekėjusius iš ląstelių ar periplazmos, tačiau susiduria su tokiomis problemomis kaip jutiklio regeneracijos sunkumai.

Klampumo ir tankio matavimai: Mažos sąnaudos ir greita analizė, tačiau trūksta selektyvumo ir reikia atsižvelgti į kelių partijų duomenis.

Veiksniai, turintys įtakos ląstelių vientisumui

Padermės inžinerija: keičia OM vientisumą per genų inžineriją, pvz., mutuoja lipoproteinų genus, tačiau gali turėti įtakos padermės augimui.

Sukeltas stresas: per didelė rekombinantinių baltymų ekspresija sukelia medžiagų apykaitos naštą, paveikiančią ląstelių fiziologiją. Todėl būtinas pagrįstas išraiškos lygių reguliavimas.

Substrato padavimo greitis: tiek per didelis, tiek mažas padavimo greitis turi įtakos ląstelių lizei ir OM vientisumui.

Temperatūra ir aeracija: Aukšta temperatūra ir mažas deguonies prieinamumas atitinkamai padidina ekspresijos įtampą ir OM nuotėkį, tačiau specifinis poveikis skiriasi.

Osmotikai: naudojami periplazminiams baltymams išlaisvinti, bet pažeisti ląstelių gyvybingumą, ribojantys jų naudojimą.

Išvada Būsimuose tyrimuose reikia giliau įsigilinti į membranos taisymo mechanizmus ir sąlygas, kad būtų galima tiksliai kontroliuoti ląstelių membranos vientisumą. Tikimasi, kad stebėsenos metodų optimizavimas ir įtakos veiksnių analizė pagerins produktų kokybę ir taip paskatins biofarmacijos pramonės plėtrą.

Taip pat aktyviai ieškome institucinių ar individualių pasaulinių partnerių. Mes siūlome konkurencingiausią atlyginimą pramonėje. Jei turite klausimų, nedvejodami susisiekite su mumis adresu [email protected]