E. coli ląstelių integritetui optimizuoti biotechnologijos gamybai

Biofarmacijos srityje Escherichia coli (E. coli) yra svarbi kaip giminės organizmas rekombinantinių baltymų išraiškai. E. coli ląstelių integritetas yra pagrindinis baltymų gamybos kiekio, kokybės ir išlaidų požiūriu. Ši integriteta apima vidinio (IM) ir išorinio (OM) membranų struktūrą ir funkciją.

Yaohai Bio-Pharma jau 15 metų dirba su E. coli fermentacija ir rekombinantinių baltymų išraiška. Naudojame įvairias strategijas, kad palaikytume aukštą E. coli ląstelių integritetą, o plazmidų gamybos kiekis viršija 1 g/L per 30 valandių augimo ciklą. Remiantis plačia patirtimi mikroorganizmų išraiškos srityje, Yaohai Bio-Pharma išdėstė kelis veiksmingus būdus stebėti ir pagerinti E. coli ląstelių integritetą biofarmacijos gamyboje.

Technikos E. coli ląstelių integritetui stebėti

Srautinis citometras: Naudoja fluorescinius spalvins, kad atskirtų ląstelių būsenas, pavyzdžiui, propidiumo jodidą aptikti ląstelės gyvybingumą ir SYTO9 įvertinti OM paryškinimo. Tačiau jis reikalauja aukštų spalvinių išlaidų ir sudėtingų operacijų.

Spalvometrinių metodų: Atspindi ląstelių lyzę aptikdamas DNA turinį, enzymų veiklą ir pan. širniuje, pvz., naudojant PicoGreen tyrimo rinkinį ir alkaulinio fosfatazo veiklos analizes. Šie metodai yra smalsūs ir reikalauja brangų spalvinių.

Aukštos našumo skilimo chromatografija: Naudojama neautomatiniam išorinio produktų koncentracijos nustatymui siekiant įvertinti OM paryškinimą. Tačiau jos automatizavimas yra sudėtingas ir analizės trukmė ilga.

Vibracinė spektroskopijos technologijos: Pavyzdžiui, artimosios ir vidurinės infrarojos spektroskopijos, kurios turi potencialo, bet reikia įveikti spektrinę taršą ir duomenų analizės iššūkius.

Dielektrinė spektroskopija: Vertina membranos integritetą matuodama ląstelių suspensijos varžymą, leidžiant realiu laiku stebėti procesą. Tačiau ji yra jautri į sutrikimus, o kalibravimas yra sunkus.

Biosensoriai: Galima aptikti junginius, išsisklaidus iš ląstelių ar periplazmo, tačiau kyla problemos, tokios kaip sensorių atnaujinimo sunkumai.

Gyvumo ir tankio matavimai: Jie yra pigūs ir greitai analizuojami, bet trūksta selektyvumo ir reikia įvertinti daugybę partijų duomenų priimant sprendimus.

Faktoriai, paveikiantys ląstelių integritetą

Šlaprio inžinerija: Keičia OI integritetą genetiniu būdu, pavyzdžiui, keičiant lipoproteino genus, tačiau tai gali turėti poveikį šlaprio augimui.

Induktuotas stresas: Rekombinantinių baltymų pertečiavimas sukelia metabolinį teršalą, paveikiant ląstelių fiziologiją. Todėl būtina tvarkingai reguliuoti išraiškos lygius.

Priedų pardavimo tempas: Abiejose rūšyse – per didelis arba per mažas pardavimo tempas – paveikia ląstelių sulaikymą ir OI integritetą.

Temperatūra ir aeracija: Aukštos temperatūros ir mažas deguonies prieinamumas padidina stresą ir OM šluostį, tačiau specifiniai poveikiai skiriasi.

Ozmotika: Naudojama periplazminio proteinių išmetimui, bet jie kenkia ląstelės gyvybingumui, ribojant jų pritaikymą.

Išvada: Būsimas tyrimas turėtų giliau įsiskirti į membranos taisymo mechanizmus ir sąlygas, kad tiksliai valdytų ląstelės membranos integritetą. Stebėsenos metodų optimizavimas ir paveikiančių veiksnių analizė tikimasi pagerinti produkto kokybę, taip skatinant biomedicinos pramonės plėtrą.

Be to, aktyviai ieškome globalių institucinių ar asmeninių partnerių. Siūlome pramonėje geresnį atlygį. Jei turite jokių klausimų, prašome jais dalintis su mumis čia [email protected]