Inovacinės Didelio Masto Genų Sintezės Technikos

Technologija, naudojama sintezuojant didelius DNA fragmentus iš nulio, yra genezinės sintezės pagrindas, apimantis metodus, tokiais kaip BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson sutapimo metodą, CPEC ir Overlap PCR. Dėl esamos technologijos ribų tiksliai sintezuoti geno ilgio DNA vienu žingsniu, būtina sujungti in vitro ir in vivo sutapimo technikas, kad oligonukleotidiniai fragmentai, sintezuoti segmentais, būtų sudedami į ilgus DNA fragmentus.

In vitro sutapimo technikos

Jie yra klasifikuojami į įvairias metodus atsižvelgiant į fragmento dydį ir sekos charakteristikas, turinčius bendrą reikalavimą naudoti įrankio enzymus. Overlap PCR, pagrįstas DNA polimerazės metodu, yra paprastas ir greitas veikimo atžvilgiu. BioBrick ir BglBrick metodai, kurie remiasi izoschizomais, leidžia standartizuotą montavimą, nors BioBrick metodas nėra tinkamas šiam proteiniams. Golden Gate klonavimo metodas, pagrįstas tipo IIS apribojimo enzymų, leidžia efektyviai sujungti kelis fragmentus be jokių sutamposimų. Gibson montavimo metodas, kuris naudoja kombinaciją iš kelių įrankio enzymų, leidžia sujungti fragmentus be sutamposimų, o jų dydis gali pasiekti kelis šimtus kb. Standartizuotas DNA komponentų projektavimas padidina esamų fragmentų naudojimo efektyvumą.

In vivo montavimo technologijos

Nors in vitro montuojami fragmentai gali pasiekti kelis šimtus kb dydžio, nors dažnai gamyba yra nepakankama, reikalaujant organizmų, pvz., Escherichia coli. Sudedant fragmentus, viršijančius 20 kb, dažnai naudojami rekombinaciniai sistemos organizmuose, įskaitant Bacillus subtilis, grybą ir inžinierių bakterijas. Grybas kaip plačiai naudojamas giminys jau keletą metų yra pripažintas dėl savo efektyvių homologinių rekombinacijos gebėjimų. Jis gali būti naudojamas šildytinių kromosomų sudarymui iki kelias megabazes (Mb) ilgio. Be to, Saccharomyces cerevisiae parodo neįtikėtinai didelę toleranciją kromosomos ilgiui, suteikiant teorinę pagrindą grybo naudojimui konstruojant superilgias kromosomas aukštesniuose organizmuose.

Paraiškos

Yaohai Bio-Pharma pagrindiniu būdu naudoja du genų sintezės montavimo metodus: ligazos montavimo ir DNR polimerizo montavimo. Ligazos montavimo metodas jungia 5'-fosforyliuotus pakilusius oligonukleotidinius fragmentus į dviejųjuoju DNR naudojant DNR ligazą. Polimerizacijos montavimo metodas naudoja DNR polimerazę, kad išplestų pakilusius oligonukleotidinius fragmentus per hibridizaciją, gauti skirtingų ilgių mišinį ir galiausiai su primers apskritai padidinti sėkmingai montuotus pilno ilgio fragmentus. Yaohai gali padėti klientams tenkinti specialius reikalavimus genų sintezėje.

Be to, aktyviai ieškome globalių institucinių ar asmeninių partnerių. Siūlome geresnį nei konkurentai atlyginimą. Jei turite bet kokios problemos, prašome ją kuo greičiau su mumis spręsti: [email protected]