Inovatyvūs surinkimo būdai didelio masto genų sintezei

Surinkimo technologija, skirta didelių DNR fragmentų sintezei nuo nulio, yra kertinis genų sintezės akmuo, apimantis tokius metodus kaip BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson assembly, CPEC ir Overlap PCR. Dėl dabartinės technologijos apribojimų tiksliai sintetinant geno ilgio DNR viename etape, būtina derinti in vitro ir in vivo surinkimo būdus, kad segmentais susintetinti oligonukleotidų fragmentai būtų surinkti į ilgus DNR fragmentus.

In vitro surinkimo metodai

Jie skirstomi į įvairius metodus, atsižvelgiant į fragmentų dydį ir sekos ypatybes, taikant bendrą reikalavimą naudoti įrankių fermentus. Persidengimo PGR, pagrįsta DNR polimerazės metodu, yra paprastas ir greitas. BioBrick ir BglBrick metodai, kurie remiasi izoschizomerais, leidžia standartizuoti surinkimą, nors BioBrick metodas netinka sulietiems baltymams. Auksinių vartų klonavimo metodas, pagrįstas IIS tipo restrikcijos fermentais, leidžia efektyviai sklandžiai surišti kelis fragmentus. Gibsono surinkimo metodas, kuriame naudojamas kelių įrankių fermentų derinys, leidžia sklandžiai surišti fragmentus, kurių dydis siekia kelis šimtus kb. Standartizuotas DNR komponentų dizainas padidina esamų fragmentų panaudojimo greitį.

In vivo surinkimo būdai

nors in vitro surinkti fragmentai gali siekti kelių šimtų kb dydžio, išeiga dažnai yra nepakankama, todėl reikia amplifikuoti naudojant tokius organizmus kaip Escherichia coli. Surenkant didesnius nei 20 kb fragmentus, dažnai naudojamos rekombinantinės sistemos organizmuose, įskaitant Bacillus subtilis, mieles ir inžinerines bakterijas. Mielės, kaip dažniausiai naudojamas šeimininkas, daugelį metų buvo pripažintos dėl savo veiksmingos homologinės rekombinacijos galimybės. Su juo galima surinkti iki kelių megabazių (Mb) ilgio dirbtines chromosomas. Be to, Saccharomyces cerevisiae pasižymi išskirtine chromosomų ilgio tolerancija, suteikdama teorinį pagrindą, kaip mieles naudoti kuriant itin ilgas chromosomas aukštesniuosiuose organizmuose.

Programos

Yaohai Bio-Pharma genų sintezei pirmiausia naudoja du surinkimo metodus: ligazės surinkimą ir DNR polimerazės surinkimą. Ligazės surinkimo metodas sujungia persidengiančius ir hibridizuotus 5'-fosforilintus oligonukleotidų fragmentus į dvigrandę DNR, naudojant DNR ligazę. Polimerazės surinkimo metodas naudoja DNR polimerazę, kad hibridizacijos būdu išplėstų persidengiančius oligonukleotidų fragmentus, gautų įvairaus ilgio mišinį ir galiausiai amplifikuotų sėkmingai surinktus viso ilgio fragmentus naudojant pradmenis. „Yaohai's“ gali padėti klientams patenkinti specifinius genų sintezės reikalavimus.

Taip pat aktyviai ieškome institucinių ar individualių pasaulinių partnerių. Mes siūlome konkurencingiausią atlyginimą pramonėje. Jei turite klausimų, nedvejodami susisiekite su mumis: [email protected]