همه دسته بندی ها
ENEN
mRNA polyA مشخصه

mRNA polyA مشخصه

صفحه اصلی >  mRNA polyA مشخصه

mRNA 3' poly(A) مشخصه

mRNA 3' poly(A) مشخصه

دم 3' poly(A) (پلی آدنوزین) mRNA جدایی ناپذیر از تنظیم پس از رونویسی است و بر صادرات، پایداری و ترجمه mRNA تأثیر می گذارد. در مورد mRNA های رونویسی شده در شرایط آزمایشگاهی (IVT)، دم پلی (A) یا در حین رونویسی همزمان به صورت الگو یا از طریق یک فرآیند باطله سازی آنزیمی به روشی غیرقالب معرفی می شود. این پلی (A) 3 به عنوان یک ویژگی کیفیت حیاتی (CQA) برای RNA های IVT عمل می کند، که نیاز به خصوصیات کامل در طول توسعه فرآیند و انتشار دسته ای دارد.

Yaohai Bio-Pharma با استفاده از تکنیک هایی مانند برش ریبونوکلئاز T3 (RNase T1)، کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا با فاز معکوس جفت یونی (IP-RP-HPLC) / کروماتوگرافی مایع - طیف سنجی جرمی خدمات تخصصی مشخصه یابی پلی (A) را ارائه می دهد. (LC-MS)، و تجزیه و تحلیل جامع داده ها.

الزامات تنظیمی برای مشخصه سازی mRNA 3' poly(A).

طبق ملاحظات نظارتی WHO، "یکپارچگی ساختار mRNA به عنوان یک ویژگی کیفی حیاتی برای انتشار mRNA در نظر گرفته می شود. بنابراین، کنترل برای یکپارچگی mRNA، کارایی درپوش 5'، حضور یا طول دم 3' poly(A) و غیره مورد نیاز است.

روش تحلیلی

تحلیل و بررسی

مواد و روش ها

خصوصیات mRNA 3' poly(A).

LC-MS پس از هضم

روش
مرحله 1. برش RNase T1

تجزیه و تحلیل مستقیم mRNA دست نخورده تمام قد توسط LC-MS به دلیل اندازه و ناهمگنی آن غیرعملی است. برای بررسی دم poly(A) باید از mRNA تمام قد جدا شود. روش رایج شامل هضم آنزیمی با RNase T1 است که به طور انتخابی انتهای 3' rG را می شکند و در عین حال توالی poly(A) را حفظ می کند. نمونه mRNA با RNase T1 هضم می شود و قطعات برش حاوی پلی (A) با استفاده از دانه های مغناطیسی پوشش داده شده با الیگو dT جدا می شوند.

مرحله 2. IP-RP-HPLC/LC-MS

دم های استخراج شده با استفاده از LC-MS مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند و اطلاعات دقیقی از طول دم را در وضوح تک نوکلئوتیدی ارائه داد. در تجزیه و تحلیل LC-MS الیگونوکلئوتیدی، جداسازی فاز معکوس جفت یونی (IP-RP) با افزودنی های فاز متحرک آمین، به دلیل قدرت تفکیک قوی و سازگاری با طیف سنجی جرمی (MS) به عنوان حالت کروماتوگرافی ارجح است.

مرحله 3. تجزیه و تحلیل داده ها

طول دم poly(A) و فراوانی نسبی آن به تعداد و شدت پیک‌ها تقسیم بر جرم آدنوزین بستگی دارد. با پردازش یا دکانولوتاسیون طیف جرمی، جرم پیش‌بینی‌شده دم پلی (A) 100 متری (33,163 Da در جعبه) تشخیص داده می‌شود، همراه با یک سری توده با فاصله 329 amu، معادل جرم آدنوزین (A). .

مورد 3' poly(A) مشخصه با LC-MS

Yaohai-BioPharma یک روش قوی برای خصوصیات mRNA 3' poly(A) ایجاد کرده است، از جمله برش RNase T1 و IP-RP-HPLC/LC-MS.

2

Yaohai-BioPharma یک روش قوی برای خصوصیات mRNA 3' poly(A) ایجاد کرده است، از جمله برش RNase T1 و IP-RP-HPLC/LC-MS.

دریافت نقل قول رایگان

با ما در تماس باشید