همه دسته بندی ها
ENEN
کارایی درپوش mRNA

کارایی درپوش mRNA

صفحه اصلی >  کارایی درپوش mRNA

کارایی درپوش mRNA 5

اهمیت تجزیه و تحلیل کارایی mRNA 5'capping

ساختار کلاهک واقع در انتهای 5' mRNA نقش اساسی در ترجمه کارآمد، تثبیت و انتقال mRNA ها در یوکاریوت ها ایفا می کند. در زمینه mRNA ژن رونویسی شده در شرایط آزمایشگاهی (IVT)، کلاهک 5' از طریق رونویسی همزمان یا فرآیندهای پوشش آنزیمی معرفی می‌شود. به عنوان یک جزء ضروری از RNA های IVT، کلاهک 5 به عنوان یک ویژگی کیفیت حیاتی (CQA) می ایستد که نیاز به توصیف جامع در طول توسعه فرآیند و انتشار دسته ای دارد.

Yaohai-Bio Pharma راه حل های تجزیه و تحلیل کارایی پوشش 5' جامعی را ارائه می دهد که شامل طراحی اسپلینت های الیگونوکلئوتیدی (کاوشگر)، برش RNase H، کروماتوگرافی مایع فاز معکوس جفت یونی IP-RP- جفت یونی با عملکرد بالا (IP-RP-HPLC)/کروماتوگرافی مایع است. طیف سنجی جرمی (LC-MS)، تجزیه و تحلیل داده ها.

الزامات نظارتی برای یکپارچگی mRNA

طبق ملاحظات نظارتی WHO، "یکپارچگی ساختار mRNA به عنوان یک ویژگی کیفی حیاتی برای انتشار mRNA در نظر گرفته می شود. بنابراین، کنترل برای یکپارچگی mRNA، کارایی درپوش 5'، حضور یا طول دم 3' poly(A) و غیره مورد نیاز است.

روش تحلیلی

تحلیل و بررسی

مواد و روش ها

کارایی درپوش mRNA 5

LC-MS پس از هضم
روش
مرحله 1. طراحی اسپلینت های الیگونوکلئوتیدی (کاوشگر).

کاوشگر برش، شامل 2'-O-متیل نوکلئوتیدها و تترادئوکسی ریبونوکلئوتیدها، برای بریدن یک رشته RNA مکمل در موقعیت های خاص زمانی که RNase H وجود دارد، عمل می کند. این روش برای تولید هدفمند قطعات RNA بزرگتر بسیار ارزشمند است.

مرحله 2. برش RNase H

یک کاوشگر بیوتینیله، که به طور استراتژیک برای تکمیل انتهای 5' mRNA طراحی شده است، همراه با RNase H برای کاتالیز کردن برش هدفمند اولیگونوکلئوتید انتهایی 5 که دارای ساختار کلاهکی است، استفاده می شود.

مرحله 3. IP-RP-HPLC/LC-MS

در تجزیه و تحلیل LC-MS الیگونوکلئوتیدی، حالت کروماتوگرافی ترجیحی جداسازی فاز معکوس جفت یونی (IP-RP) با استفاده از افزودنی های فاز متحرک آمین است. این به قدرت تفکیک برتر و سازگاری آنها با طیف سنجی جرمی (MS) نسبت داده می شود.

مرحله 4. تحلیل داده ها

توده های متمایز مشاهده شده در قطعات برش دارای کلاهک m7GpppG، بر خلاف آنهایی که دارای کلاهک دی فسفات، تری فسفات یا G غیر متیله (GpppG) هستند، شناسایی آنها را تسهیل کرده و تخمین کارایی درپوش را ممکن می سازد.

مورد تجزیه و تحلیل کارایی پوشش با LC-MS

Yaohai-Bio Pharma روش‌های قوی برای تجزیه و تحلیل کارایی پوشش mRNA، از طراحی اسپلینت‌های الیگونوکلئوتیدی (پروب)، برش RNase H، IP-RP-HPLC/LC-MS تا تجزیه و تحلیل داده‌ها را توسعه داده است.

1

کروماتوگرام یونی کل (چپ) و طیف جرمی الکترواسپری (راست) قطعات برش 5' انتهایی

دریافت نقل قول رایگان

با ما در تماس باشید