Championing Reporter RNA Modifieringsmetoder

När man väljer vilken metod för reporter-mRNA-modifieringar som är att föredra finns det inget definitivt svar eftersom varje metod och reportergen har sina egna fördelar och tillämpliga scenarier. Här är några vanliga mRNA-modifieringsmetoder och reportergener, tillsammans med deras egenskaper och lämplighet.

mRNA-modifieringsmetoder

Metylering:

1. m6A: Förknippad med mRNA-stabilitet, splitsning, translation och miRNA-bearbetning. Detektionsutmaningar inkluderar antikroppsval och lokalisering.
2. 5' Cap Nm: Förbättrar stabilitet, skarvning, polyadenylering och kärnkraftsexport. Hjälper till att skilja själv-RNA från främmande RNA.
3. Pseudouridylering: Ändrar kodoner, förbättrar stabiliteten och svarar på stress. Katalyseras av pseudouridinsyntaser.

Introduktioner av icke-naturliga nukleotider:

1. Införs under transkription med en dubbel kemisk modifieringsstrategi. Det förbättrar stabilitet, effektivitet och proteinuttryck.

Reportern Genes

1. Green Fluorescent Protein Gen (GFP): Fördelar: Lätt att upptäcka, stabila fluorescensegenskaper, ogiftig för celler, lämplig för avbildning av levande celler. Nackdelar: Begränsad fluorescensintensitet.
2. Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP): Fördelar: Över 6 gånger ljusare än vildtyps-GFP, vilket gör den mer lämplig som reportergen för att studera genuttryck, reglering, celldifferentiering och proteinlokalisering och transport inom organismer.
3. Röda fluorescerande proteiner (t.ex. mCherry): Fördelar: Längre excitations- och emissionsvåglängder, vilket resulterar i lägre bakgrund under intracellulär avbildning, utmärkt fluorescensljusstyrka och fotostabilitet, och lägre cellulär toxicitet. Nackdelar: Kan inte användas lika vanligt som GFP under vissa experimentella förhållanden.
4. Firefly Luciferas: Fördelar: I närvaro av ATP, magnesiumjoner och syre kan det katalysera oxidationen av luciferin till oxyluciferin, vilket avger bioluminescens. Den är lämplig för användning som en kontroll för att studera translationseffektiviteten hos målgener i däggdjursceller, cellviabilitet och in vivo-avbildningsanalyser.

Slutsats

När man väljer vilken metod för reporter-mRNA-modifieringar som är att föredra beror det på specifika experimentella mål, forskningsbakgrunder och experimentella förhållanden. Till exempel, om hög känslighet krävs, kan eGFP vara ett bättre val. Om avbildning vid längre våglängder behövs för att minska bakgrundsstörningar, kan röda fluorescerande proteiner som mCherry vara mer lämpliga. Dessutom, baserat på de specifika modifieringsbehoven för mRNA (t.ex. förbättra stabiliteten, förbättra translationseffektiviteten), kan motsvarande modifieringsmetod väljas.

Som den första och största mikrobiella biologiska CRDMO i Greater China, erbjuder Yaohai Bio-Pharma skräddarsydda lösningar eller fristående tjänster från hela världen, från RNA-syntes, stamkonstruktion och konstruktion, uppströms och nedströms processutveckling, till GMP eller icke - Tillverkning av läkemedelssubstanser på GMP-nivå samt fyllnings- och efterbehandlingstjänster för olika modaliteter, såsom mRNA, circRNA, plasmid-RNA, rekombinanta proteiner, peptider, enzymer, enkeldomänantikroppar och VLP för humant och veterinärt bruk.

Yaohai Bio-Pharma söker också aktivt efter institutionella eller individuella globala partners och erbjuder den mest konkurrenskraftiga ersättningen i branschen. Om du har några frågor är du välkommen att kontakta oss: [email protected]