Framtidens Reporter RNA Modifieringsmetoder

När man väljer vilken metod för modifiering av reporter mRNA som är föredraggable, finns det ingen slutgiltig svar eftersom varje metod och reporter gen har sina egna fördelar och tillämpningsbara situationer. Här är några vanliga metoder för mRNA-modifiering och reporter gener, tillsammans med deras karaktäristik och lämplighet.

metoder för mRNA-modifiering

Metylering:

1. m6A : Kopplad till mRNA-stabilitet, splicing, översättning och miRNA-bearbetning. Identifieringsutmaningar inkluderar val av antikroppar och lokalisering.
2. 5' Cap Nm : Förbättrar stabiliteten, splicing, polyadenylering och kärnexport. Hjälper till att skilja själv-RNA från främmande RNA.
3. Pseudouridylering : Ändrar kodoner, förbättrar stabiliteten och reagerar på stress. Katalyseras av pseudouridinsyntaser.

Introduktion av icke-naturliga nukleotider:

1. Infördes under transkription med en dubbel kemisk modificationsstrategi. Det förbättrar stabilitet, effektivitet och proteinetablering.

Reporter Genes

1. Green Fluorescent Protein Gene (GFP) : Fördelar: Lätt att upptäcka, stabila fluoresenserande egenskaper, otoksikt för celler, lämpar sig för livecellimaging. Nackdelar: Begränsad fluoresensintensitet.
2. Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) : Fördelar: Mer än 6 gånger ljusare än vildtypen av GFP, vilket gör det mer lämpligt som reporter gene för att studera generuttryck, regulering, celldifferentiering och proteinlokalisation och transport inom organismer.
3. Red Fluorescent Proteins (t.ex., mCherry) : Fördelar: Längre excitation- och emissionsvåglängder, vilket resulterar i lägre bakgrund under intracellulär imaging, utmärkta fluoresensljusstyrka och fotostabilitet samt lägre celldotikitet. Nackdelar: Kan inte användas lika vanligt som GFP under vissa experimentella förhållanden.
4. Firefly Luciferase fördelar: I närvaro av ATP, magnesiumioner och syre kan det katalysera oxidationen av luciferin till oxy-luciferin, vilket utsläpper bioluminscens. Det är lämpligt att använda som kontroll för att studera översättnings-effektiviteten hos målgener i mammalceller, cellvitalitet och in vivo bildningsprov.

Slutsats

När man väljer vilken metod för modifiering av rapportermRNA som är föredraggable beror det på specifika experimentella mål, forskningsbakgrunder och experimentella villkor. Till exempel, om hög känslighet krävs, kan eGFP vara en bättre val. Om bildning på längre våglängder behövs för att minska bakgrundsstörningar, kan röda fluorescerande proteiner som mCherry vara mer lämpliga. Dessutom, baserat på de specifika modifieringsbehoven av mRNA (t.ex., förstärkning av stabilitet, förbättring av översättnings-effektivitet), kan den motsvarande modifieringsmetoden väljas.

Som den första och största mikrobiella biologiska CRDMO i Större Kina erbjuder Yaohai Bio-Pharma slutna lösningar eller enskilda tjänster inom RNA-syntes, celjlinjeutveckling och -konstruktion, utveckling av upstream och downstream-processer, till GMP- eller icke-GMP-nivå för tillverkning av aktiva farmacevtiska ingredienser samt fyllnings- och slutförings tjänster för olika modaliteter, såsom mRNA, circRNA, plasmid-RNA, rekombinanta proteiner, peptider, enzym, singeldomänantikroppar och VLP:er för både människor och djur.

Yaohai Bio-Pharma söker också aktivt efter globala partner, både institutioner och enskilda personer, och erbjuder den mest konkurrenskraftiga ersättningen i branschen. Om du har några frågor, tveka inte att kontakta oss: CRO@yaohaibio.cn