mRNA-integritet
Betydelsen av mRNA-integritetsanalys
mRNA erkänns för sin inneboende instabilitet och är mottagliga för fragmentering i närvaro av externa faktorer, särskilt under in vitro transkription (IVT) och reningsprocesser, där allestädes närvarande nukleaser utgör en utmaning. Att utvärdera mRNA-integriteten är avgörande i den efterföljande utvecklingen av mRNA-baserade läkemedel, vilket säkerställer både säkerhet och produkttillgänglighet.
Yaohai-BioPharma tillhandahåller omfattande mRNA-integritetstesttjänster, med metoder som agarosgelelektrofores (AGE), kapillärelektrofores (CEG) och högpresterande vätskekromatografi (HPLC), som följer rigorösa kvalitetsstandarder för både forskning och kliniska prövningar.
Regulatoriska krav för mRNA-integritet
Enligt WHO:s reglerande överväganden, "integriteten hos strukturen av mRNA:t anses vara ett kritiskt kvalitetsattribut för frisättningen av mRNA:t. Därför behövs kontroll för mRNA-integritet, procentandel intakt mRNA, procentandel mRNA-fragment och så vidare.”
Analytisk metod
Analys |
Metoder |
mRNA-integritet |
AGE, Agarosegel elektrofores |
CGE,Kapillärelektrofores |
CGE-LIF, Kapillär gelelektrofores med ljusinducerad fluorescensdetektion |
mRNA-integritet genom agarosegelelektrofores
Agarosgelelektrofores är en allmänt använd teknik för att utvärdera integriteten av totalt RNA. Detta innebär att köra RNA-provet på en denaturerande agarosgel, färgad med antingen etidiumbromid eller SYBR Green. Den denaturerande gelén, som består av agaros, underlättar separationen av RNA baserat på storlek när en elektrisk ström appliceras. När det negativt laddade RNA:t migrerar mot den positiva änden av gelén, rör sig mindre fragment snabbare, vilket resulterar i en storleksbaserad sortering av RNA-molekyler.
mRNA-integritet genom kapillärgelelektrofores
Kapillär gelelektrofores (CGE) står som en högupplöst analytisk metod som är avgörande för att mäta integriteten hos RNA-molekyler efter längd. Denna bedömning har betydelse för kvalitetssäkring, potensförståelse och optimering av tillverkningsprocesser. I likhet med agarosgelelektrofores använder CGE en elektrisk ström för att segregera RNA-fragment baserat på deras laddning och storlek. I CGE fylls en kapillär med en separationsgelmatris infunderad med ett fluorescerande färgämne. Rörelsen av RNA längs kapillären är beroende av dess storlek, och detektion uppnås med hjälp av ultraviolett (UV) eller ljusinducerad fluorescens (LIF) detektorer.
EN
