Control Calitativ și Aplicații ale Proteinelor Recombinante

Controlul calității proteinelor recombinante este esențial pentru fiabilitatea și reproductibilitatea datelor experimentale. Fiecare etapă, de la conceperea proiectului până la procesul de producție, necesită strategii riguroase de control al calității.

Strategii de Control al Calității

Sectorul industrial respectă proceduri operaționale standard stricte, în timp ce comunitatea academică trebuie să consolideze cunoștințele profesionale pentru a îmbunătăți reproductibilitatea datelor. Proteinele cu aplicații biologice specifice sau caracteristici biochimice necesită strategii personalizate de control al calității (QC).

Exemple și Soluții Complexă

Yaohai Bio-Pharma se bucură de o experiență vastă în producerea și purificarea proteinelor recombinante, asociată cu un echipă de experți, asigurând că producția proteinelor dvs. este finalizată cu o puritate ridicată. Bazați pe experiența noastră din sute de proiecte, Yaohai rezumă cu drag cum se pot optimiza procesele de purificare a proteinelor.

Proteine care se leagă de acizi nucleici: Pașii de eliminare a acizilor nucleice, cum ar fi nucleasele sau precipitarea cu PEI, sunt necesari. Se monitorizează raportul A260nm/A280nm pentru a detecta contaminarea cu acizi nucleici.

Feritin Lant Greu la Soricile pentru crioelectronmicroscopie: Pașii de purificare trebuie optimizați, iar nucleasele trebuie adăugate pentru a reduce raportul A260nm/A280nm și pentru a asigura pureitatea proteinelor.

Proteină Hibrida Omenească dsRBEC: Lizarea celulelor folosește un buffer care conține urea, urmată de refoldare pe coloană pentru a obține proteine funcțional active.

Proteine Care Se Legă de Catiuni Divalenti: Catiunii divalenti specifiși trebuie adăugați în timpul expresiei și purificării, iar agenții chelatori trebuie evitați.

Proteine Fer-Sulfur: Imidazolul trebuie evitat pentru a preveni distrugerea clusterului [2Fe ± 2S], asigurând foldarea corectă a proteinelor și funcționarea lor.

Fragment Solubil de LLT1: Proiectarea mutanților optimizează formarea legăturilor disulfur și plierea proteinelor, rezultând în proteine stabilizate și cu o producție înaltă.

Cristalizare a Cinasei CLK1: Co-expresia cu fosfataza λ elimină fosfatele de pe site-urile de fosforilare, iar cromatografia de excludere a mărimei (SEC) și cromatografia cu schimbatori ionici sunt folosite pentru a obține un CLK1 omogen fără fosforilare heterogenă.

Proteine pentru uz antigenic: Evaluarea purității este necesară pentru a evita contaminarea cu proteine extrem de imunogene. Pentru anți-corpi cu epitope structurale, conformația tridimensională a antigenului trebuie păstrată.

Proteine predispușe la agregare: Sunt folosite strategii precum testarea diferitelor stive și reducerea temperaturii de cultură pentru a limita problemele de agregare, iar strategiile de purificare rapide sunt proiectate.

Eliminarea endotoxinelor: Metode precum cromatografia cu sarcină pozitivă și cromatografia cu ligand poliacationic elimină endotoxinele, asigurând ca nivelurile de LPS să fie sub limitele de aplicare.

Complexe proteice: Subunitățile sunt exprimate separat și montate in vitro sau co-exprimate pentru a forma complexe funcționale. Integritatea complexului este evaluată prin omogenitate și masă molara.

Concluzie

Producerea de proteine începe cu o concepție strategică, luând în considerare caracteristicile biochimice și aplicațiile. În timpul expresiei, purificării și controlului de calitate, condițiile și metodele sunt optimizate pentru stabilitate, lipsa agregării și starea nativă. Proteinele purificate sunt utilizate în diverse aplicații ulterioare, cum ar fi caracterizarea biofizică.

Yaohai Bio-Pharma caută, de asemenea, activ parteneri globali, instituționali sau individuali și oferă cele mai competitive compensații din industrie. Dacă aveți vreo întrebare, nu ezitați să ne contactați: [email protected]