Optimizarea procesului de purificare pentru insulina umană recombinantă

În ultimii ani, creșterea pacienților cu diabet a determinat cererea de insulină, dar insulină accesibilă este insuficientă. Producția eficientă și economică de insulină este crucială. Produsă în principal prin Escherichia coli (E. coli) și drojdie datorită creșterii rapide și a costului scăzut, E. coli se confruntă cu procesări complexe în aval.

Prezentare generală a procesării în aval:

Purificarea insulinei umane recombinate din corpurile de incluziune de E. coli implică mai multe etape, inclusiv recuperare, spălare, solubilizare și oxidare, scindare, schimb de tampon, purificare cromatografică, precipitare, renaturare, scindare enzimatică și formulare.

Yaohai Bio-Pharma se mândrește cu o experiență vastă în producerea și purificarea insulinei recombinate, împreună cu o echipă de experți, asigurându-se că producția dumneavoastră de insulină este finalizată cu eficiență ridicată. Folosind experiența noastră din sute de proiecte, Yaohai rezumă cu amabilitate modul de optimizare a procesului de purificare din aval pentru insulină umană recombinantă.

Recuperare și spălare corporală de incluziune:

Celulele sunt distruse folosind metode mecanice (cum ar fi ultrasunete, omogenizare la presiune înaltă) sau tratament cu lizozimă, urmate de tampoane de spălare (care conțin uree, Triton X-100 etc.) pentru a îndepărta impuritățile. În timpul spălării, parametrii trebuie optimizați pentru a asigura calitatea proteinelor, controlând în același timp costurile.

Solubilizarea și oxidarea corpului de incluziune:

Denaturanții cu concentrație mare (cum ar fi clorhidratul de guanidină și ureea) sunt utilizați pentru a solubiliza corpurile de incluziune, cu ditiotreitol sau β-mercaptoetanol adăugat pentru a preveni formarea de legături disulfurice incorecte. pH-ul și temperatura influențează semnificativ reacțiile de solubilizare și oxidare.

Clivaj și schimb de tampon:

Scindarea bromură de cianogen este utilizată pentru a elimina aminoacidul de inițiere N-terminal, dar prezintă probleme de toxicitate și specificitate scăzută. Prin dializă, ultrafiltrare sau cromatografie de excludere a mărimii, schimbul tampon îndepărtează reactivii dăunători în pregătirea operațiilor ulterioare.

Purificare cromatografică și precipitare:

Sunt utilizate tehnici cromatografice multiple pentru purificarea insulinei, incluzând cromatografia de afinitate, cromatografia de schimb ionic, cromatografia în fază inversă, cromatografia de interacțiune hidrofobă și cromatografia de excludere a mărimii. Metodele de precipitare, cum ar fi precipitarea cu pH și cristalizarea zincului, sunt utilizate pentru a îndepărta impuritățile și pentru a concentra proteinele.

Renaturare:

Proteina solubilizată este diluată într-un tampon de renaturare pentru a promova formarea corectă a legăturilor disulfurice și plierea proteinei. Cromatografia lichidă cu pliere a proteinelor și dializa sunt, de asemenea, metode utilizate pentru renaturare.

Clivaj enzimatic și formulare:

Tripsina și carboxipeptidaza B sunt utilizate pentru a scinda peptida C, formând heterodimerul activ de insulină. În cele din urmă, cristalizarea și liofilizarea sunt folosite pentru a îndepărta sărurile reziduale și tampoanele, preparând o formulare stabilă. Se adaugă aditivi specifici (cum ar fi zincul și protamina) pentru a satisface diferite nevoi clinice.

Concluzie:

Procesarea în aval a insulinei din E. coli este complex. Accentul viitor ar trebui să fie pe optimizarea acestor pași pentru o producție eficientă și economică pentru a satisface cererea și a reduce costurile.

De asemenea, Yaohai Bio-Pharma caută în mod activ parteneri instituționali sau individuali la nivel mondial și oferă cea mai competitivă compensație din industrie. Dacă aveți întrebări, vă rugăm să nu ezitați să ne contactați: [email protected]