Promovarea Metodelor de Modificare a RNA Reporter

Când se alege care metoda de modificare a mRNA-ului reporter este preferabilă, nu există un răspuns definitiv, deoarece fiecare metodă și fiecare gen reporter au propriile lor avantaje și scenarii de aplicare. Iată unele metode comune de modificare a mRNA-ului și genele reporter, împreună cu caracteristicile lor și potențialul de utilizare.

metode de Modificare a mRNA-ului

Metilare:

1. m6A : Asociat cu stabilitatea mRNA-ului, splicing-ul, traducerea și procesarea miRNA-urilor. Provocările de detecție includ selecția anticorpilor și localizarea.
2. cap 5' Nm : Îmbunătățește stabilitatea, splicing-ul, poliadenilația și exportul nuclear. Ajută la diferențierea RNA-ului propriu de cel străin.
3. Pseudouriđilare : Alterează codonii, îmbunătățește stabilitatea și reacționează la stres. Este catalizată de sintaze pseudouriidine.

Introduceri de Nucleotide Ne-naturale:

1. Introdusă în timpul transcrierii cu o strategie de modificare chimică duală. Aceasta îmbunătățește stabilitatea, eficiența și expresia proteică.

Gene reporter

1. Genul Proteinului Fluorescent Verde (GFP) : Avantaje: Ușor de detectat, proprietăți de fluorescență stabilă, nesistoxic pentru celule, potrivit pentru imaginarea celulelor vii. Dezavantaje: Intensitate limitată a fluorescenței.
2. Proteină Fluorescentă Verde Îmbunătățită (eGFP) : Avantaje: Peste șase ori mai strălucitoare decât GFP-ul de tip sălbatic, ceea ce o face mai potrivită drept gen reporter pentru studierea expresiei genetice, reglementării, diferencierii celulare și localizării/protransportului proteinelor în organism.
3. Proteine Fluorescente Roșii (de exemplu, mCherry) : Avantaje: Lungimi de undă ale excitației și emisiei mai mari, ceea ce duce la un background mai scăzut în timpul imaginii intracelulare, o excelentă strălucire și fotostabilitate fluorescentă, și o toxicitate celulară mai mică. Dezavantaje: Poate nu fi folosită atât de des ca GFP în anumite condiții experimentale.
4. Luciferaza fulgăriei : Avantaje: În prezența ATP, ionilor de magneziu și oxigen, poate cataliza oxidarea luciferinului în oxiluciferin, emițând bioluminescență. Este potrivit pentru a fi folosit ca control în studiul eficienței de traducere a genelor țintă în celulele mamifere, viabilitatea celulelor și probele de imaginare in vivo.

Concluzie

Atunci când se alege care metodă de modificare a mRNA-ului reporter este preferabilă, depinde de obiectivele experimentale specifice, contextul cercetării și condițiile experimentale. De exemplu, dacă este necesară o sensibilitate ridicată, eGFP ar putea fi o alegere mai bună. Dacă este nevoie de imaginare la lungimi de undă mai mari pentru a reduce interferența de fundal, proteinele fluorescente rosii precum mCherry pot fi mai adecvate. În plus, pe baza nevoilor specifice de modificare a mRNA-ului (de exemplu, consolidarea stabilității, îmbunătățirea eficienței de traducere), se poate selecta metoda de modificare corespunzătoare.

Ca primul și cel mai mare CRDMO de biologice microbiene din Marea Chine, Yaohai Bio-Pharma oferă soluții personalizate complete sau servicii independente, cuprinzând de la sinteză RNA, inginerie aștrilor și construcția acestora, dezvoltarea proceselor upstream și downstream, până la producția substanțelor medicamentoase la nivel GMP sau non-GMP, și servicii de umplere și finalizare pentru diverse modalități, cum ar fi mRNA, circRNA, plasmid RNA, proteine recombinante, peptide, enzyme, antibody single domain și VLP-uri pentru uz uman și veterinar.

Yaohai Bio-Pharma caută, de asemenea, activ parteneri globali, instituționali sau individuali și oferă cele mai competitive compensații din industrie. Dacă aveți vreo întrebare, nu ezitați să ne contactați: [email protected]