Susținerea metodelor de modificare a ARN-ului Reporter

Atunci când alegeți metoda de modificare a mARN-ului reporter este de preferat, nu există un răspuns definitiv, deoarece fiecare metodă și genă reporter are propriile sale avantaje și scenarii aplicabile. Iată câteva metode comune de modificare a ARNm și gene reporter, împreună cu caracteristicile și adecvarea acestora.

Metode de modificare a ARNm

Metilare:

1. m6A: Asociat cu stabilitatea ARNm, splicing, traducere și procesare miARN. Provocările de detectare includ selecția și localizarea anticorpilor.
2. 5' Cap Nm: Îmbunătățește stabilitatea, îmbinarea, poliadenilarea și exportul nuclear. Ajută la distingerea auto-ARN-ului de ARN-ul străin.
3. Pseudouridilare: Alterează codonii, îmbunătățește stabilitatea și răspunde la stres. Catalizată de pseudouridin sintetaze.

Introduceri ale nucleotidelor nenaturale:

1. Introdus în timpul transcripției cu o strategie duală de modificare chimică. Îmbunătățește stabilitatea, eficiența și exprimarea proteinelor.

Reporter Genes

1. Gena proteinei fluorescente verzi (GFP): Avantaje: Ușor de detectat, proprietăți de fluorescență stabile, netoxice pentru celule, potrivite pentru imagistica celulelor vii. Dezavantaje: Intensitate limitată a fluorescenței.
2. Proteina verde fluorescentă îmbunătățită (eGFP): Avantaje: de peste 6 ori mai strălucitoare decât GFP de tip sălbatic, ceea ce o face mai potrivită ca genă reporter pentru studierea expresiei genelor, reglarea, diferențierea celulară și localizarea și transportul proteinelor în interiorul organismelor.
3. Proteine ​​fluorescente roșii (de exemplu, mCherry): Avantaje: lungimi de undă mai lungi de excitare și emisie, rezultând un fundal mai scăzut în timpul imagistică intracelulară, luminozitate și fotostabilitate excelente de fluorescență și toxicitate celulară mai scăzută. Dezavantaje: poate să nu fie la fel de utilizat ca GFP în anumite condiții experimentale.
4. Luciferaza de licurici: Avantaje: În prezența ATP, a ionilor de magneziu și a oxigenului, poate cataliza oxidarea luciferinei în oxiluciferină, emițând bioluminiscență. Este potrivit pentru utilizare ca control pentru a studia eficiența translației genelor țintă în celulele de mamifere, viabilitatea celulară și testele imagistice in vivo.

Concluzie

Atunci când alegeți metoda de modificare a mRNA reporter este de preferat, aceasta depinde de obiectivele experimentale specifice, mediul de cercetare și condițiile experimentale. De exemplu, dacă este necesară o sensibilitate ridicată, eGFP poate fi o alegere mai bună. Dacă este nevoie de imagini la lungimi de undă mai mari pentru a reduce interferența de fundal, proteinele fluorescente roșii precum mCherry pot fi mai potrivite. În plus, pe baza nevoilor specifice de modificare ale ARNm (de exemplu, creșterea stabilității, îmbunătățirea eficienței translației), poate fi selectată metoda de modificare corespunzătoare.

Fiind primul și cel mai mare CRDMO microbian biologic din China, Yaohai Bio-Pharma oferă soluții complete, personalizate sau servicii de sine stătătoare, de la sinteza ARN, ingineria și construcția tulpinilor, dezvoltarea proceselor în amonte și în aval, la GMP sau non -Producție de substanțe medicamentoase la nivel GMP și servicii de umplere și finisare pentru diverse modalități, cum ar fi mARN, circRNA, plasmid ARN, proteine ​​recombinate, peptide, enzime, anticorpi cu un singur domeniu și VLP pentru uz uman și veterinar.

De asemenea, Yaohai Bio-Pharma caută în mod activ parteneri instituționali sau individuali la nivel mondial și oferă cea mai competitivă compensație din industrie. Dacă aveți întrebări, vă rugăm să nu ezitați să ne contactați: [email protected]