Astăzi, Yaohai este atât de interesant să-și împărtășească protocolul de transcriere in vitro pentru ARN lung. Este o strategie eficientă pe care oamenii de știință o folosesc adesea pentru a produce ARN în laborator. În acest fel, cercetătorii pot produce un număr semnificativ mare de ARN lung - ceva esențial pentru studiul în diferite domenii biologice. Aici, oferim un ghid pas cu pas pentru prepararea ARN-urilor lungi prin transcripție in vitro. Vom vorbi, de asemenea, despre cum am putea îmbunătăți procesul și să încercăm să rezolvăm unele dintre problemele cu care vă confruntați în sinteza ARN lung.
Pentru transcrierea in vitro sunt necesare mai multe componente esențiale, în special ARN lung. Va trebui să furnizați o enzimă numită ARN polimerază, material de scriere sub formă de nucleotide trifosfați (NTP), un tampon pentru a ajuta reacția și un model de ADN. Cum se face pas cu pas, puteți găsi un ghid detaliat aici:
Mai mulți factori sunt foarte importanți pentru buna funcționare a sintezei ARN. În special, cantitatea de ioni de magneziu din tamponul în sine este importantă. ARN polimeraza necesită o cantitate considerabilă de magneziu pentru a sprijini interacțiunea adecvată cu matrița ADN și plierea ulterioară a ARN-ului. Un al doilea aspect important de luat în considerare este concentrația șablonului ADN. Mai exact, trebuie să aveți suficientă reacție ADN șablon pentru a obține randamente bune de ARN.
ARN lung, desigur, va veni cu propriul set de probleme. Că aceste probleme pot avea legătură cu defalcarea ARN-ului, pot afecta modul în care ARN-ul se pliază și pot construi structuri care pot interfera cu sintetizarea ARN-ului. O modalitate de a aborda aceste provocări este modificarea tamponului pe care îl luați. Pentru o structură mai cuprinzătoare a ARN-ului, cercetătorii pot adăuga diferite substanțe chimice speciale, cum ar fi DTT și p-mercaptoetanol, pentru a ajuta ARN-ul să se plieze corect și să împiedice să se lipească sau să se aglomereze.
În plus, nu toate tipurile de ARN lung sunt la fel și unele pot necesita metode alternative de sinteză. Există caracteristici speciale pe care cercetătorii ar putea avea nevoie să le adauge în ARN, cum ar fi adăugarea unui capac 5 sau coadă Poly-A. Dacă acest lucru este necesar (după cum se explică mai târziu), atunci cercetătorii ar trebui să includă și alte enzime, cum ar fi guanililtransferaza și poli(A)polimeraza. De asemenea, trebuie să selectați o enzimă ARN polimerază adecvată care le permite în mod natural să producă mai mult ARN. De îndată ce ARN-ul trebuie sintetizat, va trebui să identificăm cea mai bună stare.
Transcrierea in vitro a ARN-urilor lungi Există o serie de utilizări cheie pentru protocolul de transcriere in vitro a ARN-ului lung în mai multe cercetări, teste și eforturi terapeutice. Ajută oamenii de știință să înțeleagă structura ARN-ului, modul în care funcționează și modul în care pot modifica genele cu tehnologiile contemporane. Mai multe alte zile - descoperirea diferitelor boli și a terapiei lor, cum ar fi terapiile foarte actuale cu ARN - să credem cât de utilă poate fi această tehnologie de citire în medicină.
Există o mulțime de avantaje în utilizarea acestui protocol. O metodă bazată pe electroforeză este în general cea mai eficientă și mai rentabilă modalitate de a produce cantități mari de ARN lung. Pe lângă calitatea ARN-ului, un randament bun este, de asemenea, un factor important pentru cercetători pentru a-i ajuta în cercetarea lor, mai ales dacă au nevoie de cantități mari de ARN pentru experimente, datorită materialului de intrare mare, pentru început. În plus, transcripția in vitro pentru ARN lung este de obicei mai precisă și reproductibilă decât sinteza chimică sau sinteza celulară a ARN.
Yaohai BioPharma este un Top 10 CDMO microbian care încorporează Protocolul de transcriere in vitro pentru ARN lung, precum și afaceri de reglementare. Avem un sistem de management al calității care este în conformitate cu standardele actuale GMP, precum și cu reglementările globale. Echipa noastră de experți în reglementare este competentă în cadrele de reglementare globale pentru a accelera lansările biologice. Asigurăm procese de producție trasabile produse de calitate, precum și respectarea regulilor FDA din SUA și EMA UE. Australia TGA și China NMPA sunt, de asemenea, mulțumite. Yaohai BioPharma a trecut cu succes auditul la fața locului al Persoanei Calificate (QP) a Uniunii Europene pentru sistemul nostru de calitate GMP, precum și pentru unitatea noastră de producție. În plus, am aprobat primele audituri de certificare ale Sistemului de management al calității ISO9001, Sistemului de management al mediului ISO14001 și Sistemului de management al sănătății și siguranței în muncă ISO45001.
Yaohai Bio-Pharma, un top 10 producător de produse biologice, este specialist în fermentarea microbiană. Am înființat o unitate avansată care este echipată cu facilități moderne și capacități puternice de producție RD. Avem cinci linii de fabricare a substanțelor medicamentoase care sunt în conformitate cu cerințele GMP pentru fermentarea și purificarea microbiană, precum și două linii de umplere-finisare care sunt automate pentru cartușe, flacoane, precum și seringi preumplute. Scalele de fermentație disponibile variază de la 100L la 500L, 1000L și 2000L. Protocolul de transcriere in vitro pentru ARN lung pentru vias este de 1 ml până la 25 ml, în timp ce seringile preumplute și specificațiile de umplere a cartuşului acoperă 1-3 ml. Atelierul nostru de producție este conform cGMP și garantează furnizarea constantă de mostre clinice, precum și articole comerciale. Planta noastră produce molecule mari care sunt expediate pe glob.
Yaohai Bio-Pharma are experiență în fabricarea de produse biologice care sunt create din microorganisme. Oferim soluții RD personalizate, precum și servicii de producție, minimizând în același timp riscurile potențiale. Am lucrat cu diverse tehnici, cum ar fi subunități celulare recombinante, vaccinuri (inclusiv peptide), factori de creștere, hormoni și Protocolul de transcriere in vitro pentru ARN lung. Suntem specialisti in multe microorganisme precum secretia intracelulara si extracelulara de drojdie (randa de pana la 15g/L) si bacteriile intracelulare solubile, precum si corpul de incluziune (randament pana la 10g/L). De asemenea, am dezvoltat o platformă de fermentație BSL-2 pentru a crea vaccinuri bacteriene. Avem o experiență de îmbunătățire a proceselor de producție, crescând astfel randamentele și reducând costurile. Avem o echipă tehnologică extrem de eficientă pentru a asigura livrarea la timp și de înaltă calitate a proiectelor. Acest lucru ne ajută să aducem mai rapid pe piață produsele dvs. unice.
Yaohai Bio-Pharma este lider în protocolul de transcriere in vitro pentru CDMO ARN lung. Obiectivul nostru principal a fost producerea de vaccinuri microbiene și terapii pentru a trata animalele de companie, sănătatea umană și veterinară. Deținem platforme de tehnologie de ultimă oră și tehnologie de producție care acoperă întregul proces de fabricație, de la ingineria tulpinilor microbiene, la procesarea bancare de celule și proiectarea metodelor până la fabricarea clinică și comercială, asigurându-ne că putem asigura livrarea cu succes a celor mai avansate soluții. Am acumulat o cantitate imensă de cunoștințe în domeniul bioprocesării microbiene. Peste 200 de proiecte au fost finalizate cu succes și ne ajutăm clienții să respecte reglementări precum cele ale FDA din SUA și ale UE EMA. De asemenea, îi ajutăm să navigheze în Australia TGA și China NMPA. Suntem capabili să răspundem rapid la cerințele pieței și să oferim servicii CDMO personalizate datorită experienței și expertizei noastre.