Recombinante eiwitproductie: gemanipuleerde E. coli-stammen Nederland

Escherichia coli (E. coli) heeft een belangrijke rol gespeeld bij de productie van recombinante eiwitten in de biofarmaceutische industrie, en diende als de eerste expressievector voor de productie van biologische medicijnen. E. coli kan bogen op een snelle groei, handige genetische manipulatie en snelle synthese van recombinante eiwitten, naast andere voordelen. Uitgebreide modificaties hebben E. coli tot een optimale keuze gemaakt voor eiwitexpressie, wat heeft geleid tot het ontwerp van verschillende gemanipuleerde stammen van E. coli.

Yaohai Bio-Pharma is gespecialiseerd in het leveren van one-stop outsourcing services voor de fermentatie, zuivering, formuleringsprocesontwikkeling en productie van een reeks biofarmaceutica met behulp van E. coli-expressiesystemen. Met betrekking tot de uitgebreide ervaring van Yaohai hebben we samengevat dat vier veelvoorkomende E. coli-stammen worden gebruikt voor recombinante eiwitproductie en hun kenmerken.

BL 21-stam

Afkomstig uit de E. coli B-lijn, mist de BL21-stam Lon-protease en buitenste membraanprotease OmpT. Lon-protease breekt voornamelijk exogene eiwitten af, terwijl OmpT voornamelijk extracellulaire matrixeiwitten afbreekt. De afwezigheid van deze twee belangrijke proteasen kan de afbraak van recombinante eiwitten effectief voorkomen.

Origami-soort

Origami-stam, een derivaat van E. coli K-12, heeft mutaties in thioredoxine-reductase en glutathionreductase, die de vorming van correct gevouwen eiwitten met disulfidebindingen vergemakkelijken en de oplosbaarheid van eiwitten verbeteren. De Origami-stam, waaronder Origami, Origami 2 en Origami B, zijn geschikt voor de expressie van actieve eiwitten met disulfidebindingen.

SHuffle-spanning

SHuffle-stam brengt constitutief de disulfidebindingisomerase DsbC tot expressie in het cytoplasma, wat de vorming van correcte disulfidebindingen in geoxideerde eiwitten bevordert. Het dient ook als een moleculaire chaperonne voor eiwitvouwing, wat helpt bij de vorming van de correcte conformatie.

Rosetta-soort

De Rosetta-stam vult E. coli aan met tRNA's die overeenkomen met zeldzame codons, met als doel het expressieniveau van exogene genen, met name eukaryotische genen, in prokaryotische systemen te verbeteren. Afgeleid van BL21 en met het chloramfenicol-resistente pRARE-plasmide, vult het zes tRNA's aan die overeenkomen met zeldzame codons (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC en GGA) die oorspronkelijk afwezig waren in E. coli, wat zorgt voor een meer "universele" eiwitexpressie.

Conclusie

De drie belangrijkste factoren voor succesvolle productie van recombinante eiwitten zijn de gastheer, vector en kweekomstandigheden. Op basis van een begrip van de fysisch-chemische eigenschappen van het recombinante eiwit, de unieke voordelen van elke stam en de specifieke behoeften van het experiment, moet de meest geschikte gastheer worden geselecteerd. Daarnaast moeten factoren zoals plasmidevectoren, temperatuur en inductoren worden geoptimaliseerd om de eiwitexpressie te verbeteren.

Yaohai Bio-Pharma is ook actief op zoek naar institutionele of individuele wereldwijde partners en biedt de meest concurrerende compensatie in de industrie. Als u vragen heeft, neem dan gerust contact met ons op: [email protected]