Recombinante Eiwitproductie: Gegenereerde E. coli-stammen

Escherichia coli (E. coli) heeft een belangrijke rol gespeeld in de productie van recombinante eiwitten in de biofarmaceutische industrie, waarbij het diende als de eerste expressievector voor de vervaardiging van biologische geneesmiddelen. E. coli onderscheidt zich door snelle groei, gemakkelijke genetische manipulatie en snel samenvoegen van recombinante eiwitten, onder andere voordelen. Uitgebreide aanpassingen hebben ervoor gezorgd dat E. coli een optimale keuze is geworden voor eiwitexpressie, wat heeft geleid tot de ontwikkeling van verschillende gemodificeerde E. coli-stammen.

Yaohai Bio-Pharma specialiseert zich in het bieden van volledige outsourcingdiensten voor fermentatie, zuivering, formulering en procesontwikkeling en -productie van een reeks biopharmaceutische producten met behulp van E. coli-expressiesystemen. Op basis van de uitgebreide ervaring van Yaohai kunnen we concluderen dat vier veelvoorkomende E. coli-stammen worden gebruikt voor de productie van recombinante eiwitten en hun kenmerken.

BL 21 stam

Afgeleid van de E. coli B-lijn, ontbreekt de BL21-stroom Lon-protease en de buitenste membraneprotease OmpT. Lon-protease degradeert voornamelijk exogene eiwitten, terwijl OmpT voornamelijk extracellulaire matrixeiwitten degradeert. Het ontbreken van deze twee belangrijke proteasen kan effectief de afbraak van recombinante eiwitten voorkomen.

Origami-streep

De Origami-streep, een afgeleide van E. coli K-12, heeft mutaties in thioredoxinereductase en glutathionereductase, die het vormen van juist gevouwen eiwitten met disulfidebruggen ondersteunen en de oplosbaarheid van eiwitten verhogen. De Origami-streep, inclusief Origami, Origami 2 en Origami B, zijn geschikt voor de expressie van actieve eiwitten met disulfidebruggen.

SHuffle-streep

De SHuffle strain expresset constitutief de disulfidebinding isomerase DsbC in de cytoplasma, wat bevordert de vorming van juiste disulfidebindingen in oxidiseerde eiwitten. Het dient ook als een moleculaire chaperone voor eiwitvouwing, waarbij het helpt bij de vorming van de juiste conformatie.

Rosetta strain

De Rosetta strain supplementeert E. coli met tRNAs die overeenkomen met zeldzame codons, met als doel het verbeteren van het expressieniveau van exogene genen, vooral eukaryotische genen, in prokaryotische systemen. Afgeleid van BL21 en dragend van het chloramfenicolresistente pRARE plasmid, supplementeert het zes tRNAs die overeenkomen met zeldzame codons (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC en GGA) die oorspronkelijk ontbraken in E. coli, waardoor een meer "universele" eiwitexpressie wordt geboden.

Conclusie

De drie belangrijkste factoren voor succesvolle productie van recombinante eiwitten zijn de gastheer, het vector en de cultuvoorwaarden. Op basis van een begrip van de fysicochemische eigenschappen van het recombinante eiwit, de unieke voordelen van elk stam, en de specifieke behoeften van het experiment, moet de meest geschikte gastheer worden geselecteerd. Daarnaast dienen factoren zoals plasmidvectoren, temperatuur en诱导middelen te worden geoptimaliseerd om de eiwitexpressie te verbeteren.

Yaohai Bio-Pharma zoekt ook actief naar globale partners, zowel instellingen als individuen, en biedt de meest competitieve vergoeding in de branche. Als u vragen heeft, aarzel dan niet om contact met ons op te nemen: [email protected]