এমআরএনএর 5'-এন্ড ক্যাপিং একটি প্রয়োজনীয় পরিবর্তন। ক্যাপ স্ট্রাকচার বিশেষত Cap1 স্ট্রাকচার সহ এমআরএনএ বাচ্চাগুলি জীবনে অভ্যন্তরীণ অটোইমিউন প্রতিক্রিয়া থেকে বাঁচায়, যা ফলে কার্যকর প্রোটিন অনুবাদ ঘটায়।
এনজাইমেটিক ক্যাপিং (দুই-ধাপের পদ্ধতি) এমআরএনএ ক্যাপিং-এর প্রচলিত পদ্ধতি, যা ইউক্যারিয়টিক জীবের ক্যাপিং প্রক্রিয়ার সাথে অনুরূপ। এক শ্রেণির এনজাইমের কাজের ফলে, 7-মেথাইলগুয়ানিন (m7G) এমআরএনএর 5'-এন্ডের সাথে 5'-5' ট্রায়োফসফেট বন্ধনের মাধ্যমে যুক্ত হয় এবং ক্যাপ স্ট্রাকচার Cap 1 (m7GpppN) গঠনের জন্য মেথাইলেশন পরিবর্তন ঘটায়।
প্রাকৃতিক ক্যাপ স্ট্রাকচার গঠনের ডায়াগ্রাম
এনজাইমেটিক ক্যাপিং প্রতিক্রিয়ার ফ্লো নিম্নরূপ:
টি7 পলিমেরেজের উপস্থিতিতে বাইরে অনুবাদ (IVT) এর জন্য লিনিয়ারাইজড প্লাজমিড DNA একটি টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহৃত হয়, এবং ভ্যাকসিনিয়া ক্যাপিং এনজাইম এবং 2'-O-মেথালট্রান্সফেরেজ ব্যবহার করে একধাপসহ শোধনের পর একটি 5' এন্ড-ক্যাপ স্ট্রাকচার সহ mRNA গঠিত হয়।
পছন্দসই সেবা |
সেবা বিবরণ |
ডেলিভারি পিরিয়ড (ডে) |
mRNA Enzymatic Capping |
এনজাইমেটিক ক্যাপিং রিঅ্যাকশন |
1 |
ক্যাপিং রিঅ্যাকশন অপটিমাইজেশন - বাছাইযোগ্য |
প্রতিক্রিয়া উপাদান ডিজাইন এবং অপটিমাইজেশন |
3~7 |
ক্যাপিং রিএকশন কম্পোনেন্টটি অপটিমাইজড হয়েছে, এবং mRNA ট্রানসক্রিপ্টের উৎপাদন বেশি পরিমাণে বৃদ্ধি পেয়েছে।
ক্যাপড মessenger RNA (mRNA) 293T সেলে ট্রান্সফেক্ট করা হয়েছে, এবং লক্ষ্য প্রোটিনের এক্সপ্রেশন নির্দেশ করা যায়।
পরীক্ষা পরিবেশ এবং ব্যবহার্য জিনিসপত্রের উপর RNase-এর শক্তিশালী নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে, mRNA-এর বিঘ্ন কার্য কার্যক্ষমতা বাড়ানো হয়।
Yaohai Bio-Pharma’s mRNA প্ল্যাটফর্ম একটি পূর্ণাঙ্গ ক্যাপিং রিএকশন প্রক্রিয়া তৈরি করেছে।
EGFP mRNA-এর জন্য, যা এনজাইমেটিক ক্যাপিং দ্বারা প্রস্তুত করা হয়েছে, 293T সেলে 24 ঘন্টা পর একটি উচ্চ স্তরের eGFP ফ্লোরেসেন্স সিগন্যাল (সবুজ ফ্লোরেসেন্স) পর্যবেক্ষণ করা যায়, যা Western Blot (WB) দ্বারা নির্দেশিত হয়, এটি প্রমাণ করে যে লক্ষ্য প্রোটিন enhanced green fluorescent protein (eGFP) ইনভিট্রো ভাবে কার্যকরভাবে এক্সপ্রেশন হয়।
এনজাইমেটিক ক্যাপড eGFP mRNA-এর 293T সেলে এক্সপ্রেশন