ইয়াওহাই বায়ো-ফার্মা PIE সিস্টেমের উপর ভিত্তি করে সার্কআরএনএ প্রস্তুত করে (এক্সন এবং ইন্ট্রোনের প্রান্তিককরণ), যা আরএনএ সাইক্লাইজেশন অর্জনের জন্য টাইপ I ইন্ট্রোনের স্ব-বিভক্ত ফাংশনের উপর নির্ভর করে। PIE গঠনটি T4 td জিন বা মাছের tRNA পূর্ববর্তী জিন ব্যবহার করে ডিজাইন করা হয়েছে এবং বিন্যাসটি নিম্নরূপ:
আরএনএ ইন্ট্রন এবং সাপোর্টিং এক্সন ফ্র্যাগমেন্ট দুটি অংশে বিভক্ত (5' টার্মিনাল এবং 3' টার্মিনাল), যেখানে 5' টার্মিনাল সিকোয়েন্স টার্গেট সিকোয়েন্সের লেজে স্থানান্তরিত হয়, 3' টার্মিনাল সিকোয়েন্সটি সামনের অংশে ঢোকানো হয়। টার্গেট সিকোয়েন্স, এবং টার্গেট জিন সিকোয়েন্স মাঝখানে ঢোকানো হয়।
GTP-এর ক্যাটালাইসিসের অধীনে, PIE কাঠামো ইন্ট্রোন ব্যতীত অন্যান্য ক্রমগুলির চক্রাকারে নেতৃত্ব দেয়। সাইক্লাইজেশন হারের একটি যুক্তিসঙ্গত বর্ধিতকরণ কৌশলের সাথে মিলিত, ইয়াওহাই বায়ো-ফার্মা 4% এর বেশি সাইক্লাইজেশন হার সহ 80 kb পর্যন্ত সিকোয়েন্সের সাইক্লাইজেশন অর্জন করতে পারে।
চিত্র 1. PIE সিস্টেমের উপর ভিত্তি করে সার্কআরএনএর ইন ভিট্রো সঞ্চালন
প্রক্রিয়া | ঐচ্ছিক পরিষেবা | পরিষেবা বিশদ | ডেলিভারি সময়কাল (কাজের দিন) |
সার্কআরএনএ সিকোয়েন্স ডিজাইন এবং অপ্টিমাইজেশান | কোডিং সিকোয়েন্সের ডিজাইন এবং অপ্টিমাইজেশন |
CDS ক্রম প্রান্তিককরণ সিডিএস কোডন অপ্টিমাইজেশান |
1 |
নন-কোডিং সিকোয়েন্সের ডিজাইন এবং অপ্টিমাইজেশন |
ইন্ট্রোন এবং এক্সন সিকোয়েন্স ডিজাইন এবং অপ্টিমাইজেশান হোমোলগাস আর্ম সিকোয়েন্স ডিজাইন এবং অপ্টিমাইজেশান স্পেসার সিকোয়েন্স ডিজাইন এবং অপ্টিমাইজেশান |
1-2 |
সার্কআরএনএ উপাদান | জৈবিক ফাংশন | অপ্টিমাইজেশান কৌশল | |
দুই-টার্মিনাল ইন্ট্রন এবং এক্সন সিকোয়েন্স | ইন্ট্রনের বাইরে সিকোয়েন্সের সাইক্লাইজেশনের জন্য জিটিপি-ক্যাটালাইজড ইন্ট্রন সেলফ স্প্লিসিং। | T4 td জিন বা মাছের তেল tRNA পূর্ববর্তী জিন অনুযায়ী ডিজাইন করা হয়েছে। | |
কোডিং | আইআরএস | অভ্যন্তরীণ রাইবোসোম স্বীকৃতি সাইট যা সার্কআরএনএর অনুবাদ নিয়ন্ত্রণ করে। | বিভিন্ন ভাইরাল উত্স থেকে অভ্যন্তরীণ রাইবোসোম এন্ট্রি সাইট (IRES) সিকোয়েন্সের স্ক্রীনিং, যেমন EMCV, CVB3 উত্স। |
CDS গুলি | প্রোটিন-কোডিং অঞ্চল, অ্যান্টিজেন, অ্যান্টিবডি বা অন্যান্য কার্যকরী প্রোটিনের জন্য সিকোয়েন্স কোডিং। | কোডন অপ্টিমাইজেশান অনুবাদের মাত্রা বাড়ায়; কিছু অ-অনুকূল কোডন প্রোটিন ভাঁজ করার ক্ষেত্রে ভূমিকা পালন করতে পারে। | |
নন-কোডিং | নন-কোডিং সিকোয়েন্স | জিন বা প্রোটিন নিয়ন্ত্রণের জন্য miRNA বা প্রোটিনকে লক্ষ্য করুন। | miRNAs বা প্রোটিনের জন্য নির্দিষ্ট বাইন্ডিং সাইট টার্গেট করা বাইন্ডিং সাইটের ক্রম পুনরাবৃত্তি করতে পারে। |
ইয়াওহাই বায়ো-ফার্মা কন্ট্রোল প্রোডাক্ট এনহ্যান্সড গ্রীন ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিন (ইজিএফপি) সার্কআরএনএ চালু করেছে, যা RNA-এর সাইক্লাইজেশন অর্জনের জন্য PIE সিস্টেমের উপর ভিত্তি করে।
একটি প্রচলিত ট্রান্সফেকশন রিএজেন্ট ব্যবহার করে, eGFP circRNA 293T কোষে স্থানান্তরিত হয়, এবং eGFP (সবুজ) ফ্লুরোসেন্ট সংকেত 24 ঘন্টা পরে সনাক্ত করা যায়, যা 48 ঘন্টা পরে উন্নত করা হবে৷ ফ্লুরোসেন্ট সংকেত এখনও 7 তম দিনে এবং 14 তম দিনে সনাক্ত করা যেতে পারে৷ স্থানান্তর
ইজিএফপি সার্কআরএনএর ইন ভিট্রো এক্সপ্রেশন বৈধতা