আরএনএ পূর্বপ্রস্তুতির ব্যাচ প্রস্তুতির বিষয়ে, একটি সাধারণত ব্যবহৃত পদ্ধতি হল ইনভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন (IVT)। IVT রিয়্যাকশনটি টি৭ প্রোমোটার বিশিষ্ট লিনিয়ারাইজড প্লাজমিড ডিএনএকে টেমপ্লেট হিসেবে ব্যবহার করে এবং টি৭ আরএনএ পলিমেরেজের উপস্থিতিতে নিউক্লিওসাইড ট্রায়োফসফেট (এনটিপি) হিসেবে উপাদান হিসেবে আরএনএ পূর্বপ্রস্তুতি সংশ্লেষণ করে।
ইন ভিট্রো সাইক্লিজেশন পদ্ধতির মধ্যে রয়েছে রসায়নিক যোগ, এনজাইমেটিক যোগ এবং পারমিউটেড ইনট্রন-এক্সন (PIE) পদ্ধতি। রসায়নিক যোগ এবং এনজাইমেটিক যোগ ছোট আরএনএ-এর সাইক্লিজেশনের জন্য উপযুক্ত। যখন ফ্র্যাগমেন্ট 100 এনটি থেকে বড় হয়, তখন সাইক্লিজেশনের হার খুব বেশি হ্রাস পাবে। বিপরীতভাবে, PIE সিস্টেম ভিত্তিক নিউক্লিয়েজ পদ্ধতি 8 কিবি সিকোয়েন্সের সাইক্লিজেশন সম্পন্ন করতে পারে।
গুয়ানোসিন ট্রায়াফসফেট (GTP) এর ক্যাটালিসিসের অধীনে, PIE স্ট্রাকচার এক্সট্রা-ইনট্রন সিকোয়েন্সের সাইক্লিজেশন সম্পন্ন করে। সাইক্লিজেশনের হার বাড়ানোর জন্য একটি যৌক্তিক পদক্ষেপ সহ, যাওহাই বায়ো-ফার্মা সর্বোচ্চ 4 কিবি সিকোয়েন্সের সাইক্লিজেশন সম্পন্ন করতে পারে, যার সাইক্লিজেশনের দক্ষতা 80% এর বেশি।
আরএনএর ইন ভিট্রো সাইক্লিজেশন বিক্রিয়া নিম্নলিখিতভাবে প্রবাহিত হয়:
আরএনএ প্রিকার্সার ইন ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন দ্বারা সংশ্লেষিত হয়, এবং GTP এর ক্যাটালিসিসের অধীনে PIE উপাদান নিজেই স্প্লাইসিং সম্পন্ন করে এবং circRNA গঠন করে।
প্রক্রিয়া | সেবা বিবরণ | আগে পাঠানোর সময় (কাজের দিন) |
ইন ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন এবং সার্কুলেশন | বিক্রিয়া সিস্টেম নিশ্চিতকরণ | ১-২ |
ইন ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন এবং সাইক্লিজেশন রিএকশন | ||
আরএনেজ আর ডাইজেস্টিয়ন | ||
বিক্রিয়া অপটিমাইজেশন | রিএকশন কম্পোজিশন, সময় অপটিমাইজেশন | 2-5 |
চার কিলোবেস (kb) পর্যন্ত RNA সাইক্লিজেশন সম্পন্ন করা যায়।
একটি যৌক্তিক সিকোয়েন্স অপটিমাইজেশন পদক্ষেপের মাধ্যমে ৮০% বেশি হারে সাইক্লিজেশন সম্পন্ন করা যায়।
পরীক্ষা পরিবেশ এবং ব্যবহার্য সামগ্রীতে RNase এর শক্ত নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে RNA বিঘ্ন করা কার্যক্ষমভাবে রোধ করা হয়।
টিউব মধ্যে সার্কুলার আরএনএ এর চক্রবত্তি এবং বাড়ানো
PIE পদ্ধতির ভিত্তিতে, যাওহাই বায়ো-ফার্মা সার্কুলার আরএনএ এর ক্রমকে অপটিমাইজ করেছে, যার ফলে এগারোস জেল ইলেকট্রোফোরেসিস (AGE) দ্বারা চক্রবত্তির হার ৮০% বেশি। RNase R ব্যবহার করে সার্কুলার আরএনএ এর বাড়ানোর ফলাফল দেখায় যে লাইনিয়ার আরএনএ প্রিকার্সারটি পাচানো হয়েছে, এবং আরও শোধনের পরে অধিকাংশ ছেদিত সার্কুলার আরএনএ সরানো যায়। শোধন দ্রবণটি যাওহাই বায়ো-ফার্মা দ্বারা নিজের কাছে উন্নয়ন করা হয়েছে।
টিউব মধ্যে সার্কুলার আরএনএ এর চক্রবত্তি এবং বাড়ানো