MRNA-এর বৃহত পরিমাণে উৎপাদনের সাথে, ইন ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন (IVT) একটি বেশি দক্ষ এবং পরিপক্ব পদ্ধতি। IVT বিক্রিয়া একটি লাইনিয়ার প্লাজমিড DNA-কে টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করে, যা T7 প্রোমোটার ধারণ করে, এবং T7 RNA পলিমেরেজের উপস্থিতিতে নিউক্লিওসাইড ট্রায়োফসফেট (NTPs) হিসাবে উপাদান হিসাবে mRNA সংশ্লেষণ করে।
নিউক্লিওটাইড পরিবর্তন এমআরএনএ সম্পর্কে অনুসন্ধানের মধ্যে একটি ভাঙনা। অপরিবর্তিত এমআরএনএ অণুগুলি কোষজ আরএনএ সেন্সর দ্বারা চিহ্নিত হয় যা জন্মগত অনুরক্ষণশীলতা সক্রিয় করে। এমআরএনএ বায়ো প্রতিরক্ষিতা এবং অনুবাদ দক্ষতা বিবেচনা করে, আইভি টি প্রক্রিয়া সাধারণত কিছু পরিবর্তিত এনটিপি ব্যবহার করে, এবং সাধারণ পরিবর্তিত নিউক্লিওটাইড হল মিথ্যা-ইউরিডিন (Ψ), এন1-মেথাইল-মিথ্যা-ইউরিডিন (N1Ψ) এবং 5-মেথাইলসাইটোসিন (5mC)।
বাইরে ট্রান্সক্রিপশন (IVT) বিক্রিয়ার ডায়াগ্রাম
পছন্দসই সেবা |
সেবা বিবরণ |
আগে পাঠানোর সময় (কাজের দিন) |
বাইরে ট্রান্সক্রিপশন (IVT) |
IVT, বাইরে ট্রান্সক্রিপশন | 1 |
নিউক্লিওটাইড পরিবর্তন (Ψ/N1Ψ/5mC, ইত্যাদি.) | ||
ডিএনএ টেমপ্লেট অপসারণ (ডিএনএজ আই) | ||
আইভিটি শর্ত অপটিমাইজেশন - ঐচ্ছিক |
আইভিটি রিয়াকশন কম্পোনেন্ট ডিজাইন এবং অপটিমাইজেশন | 2-5 |
জীবাণুতে এমআরএনএ স্থিতিশীলতা এবং প্রোটিন এক্সপ্রেশন উন্নয়ন।
এমআরএনএ ফ্র্যাগমেন্ট প্রস্তুতি সর্বোচ্চ ১০কেবি পর্যন্ত সম্ভব।
আইভিটি রিয়াকশন শর্ত অপটিমাইজ করে, ট্রান্সক্রিপশন হার সর্বোচ্চ ১:২০০।
পরীক্ষাগার পরিবেশ এবং ব্যবহার্য সামগ্রীর মাধ্যমে RNase-এর শক্তিশালী নিয়ন্ত্রণ করা মRNA বিঘ্নের কার্যকরভাবে প্রতিরোধ করতে পারে।
বর্তমান IVT রিয়্যাকশন সিস্টেমটি প্রায় ১০০ এনটি দৈর্ঘ্যের সintéথেটিক সিস্টেমের জন্য অপটিমাইজড, এটি যথেচ্ছ দৈর্ঘ্যের mRNA-এর জন্য নয়। mRNA সিকোয়েন্স যত বড়, তার ট্রান্সক্রিপশন করা তত কঠিন এবং বিঘ্নের প্রতি আরও বেশি সংবেদনশীল।
আনুমানিক ১০ কিবি দৈর্ঘ্যের ব্যবস্থানুযায়ী mRNA সিকোয়েন্স প্রস্তুত করার জন্য, যাওহাই বায়ো-ফার্মা সংক্ষিপ্ত পরীক্ষাগার ডিজাইন, রিয়্যাকশন শর্তাবলীর অবিচ্ছিন্ন অপটিমাইজেশন এবং RNase-এর শক্তিশালী নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে বাহিরে ট্রান্সক্রিপশনের পর ১ মাইক্রোগ্রাম লিনিয়ারাইজড প্লাজমিড থেকে ১:১৩৫ ট্রান্সক্রিপশন অনুপাতে উচ্চ গুণবত্তার নমুনা সফলভাবে প্রস্তুত করেছে এবং ১৩৫ মাইক্রোগ্রাম প্রাথমিকভাবে শোধিত mRNA পণ্য পেয়েছে।
mRNA চিহ্নিতকরণ (অ্যাগারোস জেল ইলেকট্রোফোরেসিস)