দুই-ধাপের এনজাইমেটিক ক্যাপিং এর তুলনায়, এক-ধাপের co-transcriptional capping পদ্ধতি প্রক্রিয়া ফ্লো সাইনিফিক্যান্টলি কমাতে পারে। এই পদ্ধতি ফলাফল-ভিত্তিক এবং তা in vitro transcription (IVT) রিএকশনে cap analogs যোগ করা অন্তর্ভুক্ত রয়েছে। Cap analogs ট্রান্সক্রিপশনের শুরুতে প্রবেশ করানো যেতে পারে, এবং ট্রান্সক্রিপশনের সমাপ্তিতে cap structure সহ mRNA পাওয়া যায়। বর্তমান third-generation cap analogs reverse capping এড়াতে পারে এবং সরাসরি Cap 1 structure ট্রান্সক্রিপশন পণ্যে যোগ করতে পারে।
এমআরএনএ ইনভিভো ইমিউনোজেনিসিটি এবং অনুবাদ দক্ষতা বিবেচনার জন্য, আইভিটি প্রক্রিয়া অনেক সময় কিছু ধরনের পরিবর্তিত এনটিপি গ্রহণ করে, এবং সাধারণ পরিবর্তিত নিউক্লিওটাইড হল মিথুন-ইউরিডিন (Ψ), এন1-মেথাল-পসুডোইউরিডিন (N1Ψ), এবং 5-মেথালসাইটোসিন (5mC)।
চিত্র: এমআরএনএ কো-অনুবাদন এবং ক্যাপিং বিক্রিয়ার ডায়াগ্রাম
পরিষেবা |
সেবা বিবরণ |
আগে পাঠানোর সময় (কাজের দিন) |
কো-অনুবাদন ক্যাপিং |
ইন ভিট্রো অনুবাদনের প্রতিক্রিয়া (ক্লিন ক্যাপ অ্যানালগ) | ১-২ |
নিউক্লিওটাইড পরিবর্তন (Ψ/এন1Ψ/5mC) | ||
ডিএনএ টেমপ্লেট অপসারণ (ডিএনএজ আই) | ||
আইভিটি শর্ত অপটিমাইজেশন - ঐচ্ছিক |
প্রতিক্রিয়া উপাদান ডিজাইন এবং অপটিমাইজেশন | 3-7 |
অনেকগুলি বাছাইযোগ্য নিউক্লিওটাইড পরিবর্তনের কৌশল প্রোটিন অভিব্যক্তি উন্নত করতে পারে।
উচ্চ ট্রান্সক্রিপশন অনুপাত এবং উচ্চ ক্যাপিং দক্ষতা অর্জন করুন।
৯৫% এর চেয়ে বেশি ক্যাপিং হার অর্জন করুন।
পরীক্ষাগার পরিবেশ এবং ব্যবহার্য সামগ্রীতে আরএনএসে সংক্রমণ নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে এমআরএনএ বিঘ্নিত হওয়ার ঝুঁকি কার্যকরভাবে রোধ করুন।
যাওহাই বায়ো-ফার্মা একটি পরিপক্ক সহ-ট্রান্সক্রিপশনাল ক্যাপিং প্রক্রিয়া প্ল্যাটফর্ম তৈরি করেছে, যেখানে শুদ্ধ ক্যাপ অ্যানালগ ব্যবহার করে সরাসরি ক্যাপ১ স্ট্রাকচার যুক্ত করা হয় এবং বিপরীত ক্যাপিং এড়ানো হয়। নির্দিষ্ট নমুনা পূর্ব-চিকিৎসা এবং ক্যাপিলারি ইলেকট্রোফোরেসিস (সিই) ডিটেকশনের পরে, উন্নত হর্টন্ত্রিক ফ্লোরেস্সেন্ট প্রোটিন (ইজিএফপি) এমআরএনএর ক্যাপিং হার ৯৫% এর চেয়ে বেশি হতে পারে।
ইজিএফপি এমআরএনএ ক্যাপিং দক্ষতা ৯৫% এর চেয়ে বেশি
কো-ট্রানসক্রিপশনাল ক্যাপিং পদ্ধতিতে প্রস্তুত eGFP mRNA এবং mCherry mRNA কে যথাক্রমে 293T সেলে ট্রান্সফেক্ট করা হয়, এবং 48 ঘন্টা পর শক্তিশালী ফ্লোরেসেন্ট সিগন্যাল পর্যবেক্ষণ করা হয়, যা নির্দেশ করে যে mRNA কার্যকরভাবে 293T সেলে অভিব্যক্ত হচ্ছে।
293T সেলে eGFP mRNA এবং mCherry mRNA এর অভিব্যক্তি