সার্কআরএনএ প্রস্তুতির জন্য সাইক্লাইজেশনের জন্য রৈখিক আরএনএ প্রিকারসার উপাদান (আরএনএ প্রিকারসার) প্রয়োজন, যেখানে আরএনএ প্রিকার্সর সাধারণত ট্রান্সক্রিপশন টেমপ্লেট হিসাবে লিনিয়ারাইজড প্লাজমিড ডিএনএ ব্যবহার করে প্রস্তুত করা হয় এবং T7 আরএনএ পলিমারেজের সাহায্যে ভিট্রোতে প্রতিলিপি করা হয়।
ইন ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন (IVT) এর জন্য উচ্চ মানের প্লাজমিড ডিএনএ অপরিহার্য। পরিপক্ক প্লাজমিড প্রস্তুতি পরিষেবা প্ল্যাটফর্মের উপর ভিত্তি করে, ইয়াওহাই বায়ো-ফার্মা IVT পণ্যগুলির অখণ্ডতা নিশ্চিত করতে একটি উচ্চ বিশুদ্ধতা এবং স্ট্যান্ডার্ড লিনিয়ারাইজড প্লাজমিড DNA (pDNA) প্রস্তুতি পরিষেবা প্রদান করতে পারে।
প্রক্রিয়া | ঐচ্ছিক পরিষেবা | পরিষেবা বিশদ | প্রসবের সময়কাল (কাজের দিন) |
বৃত্তাকার প্লাজমিড প্রস্তুতি | জিন সংশ্লেষণ | জিন সংশ্লেষণ (তৃতীয় পক্ষ) | 7-10 |
প্লাজমিড পরিবর্ধন | প্লাজমিড পরিবর্ধন | 2 | |
প্লাজমিড নিষ্কাশন | |||
লিনিয়ারাইজড প্লাজমিড প্রস্তুতি | প্লাজমিড লিনিয়ারাইজেশন এবং পরিশোধন | প্লাজমিড লিনিয়ারাইজেশন | 1 |
লিনিয়ারাইজেশন ডিএনএ পরিশোধন | |||
প্লাজমিড ডিএনএ মান নিয়ন্ত্রণ | ঘনত্ব বিশুদ্ধতা | আল্ট্রাভায়োলেট (ইউভি) স্পেকট্রোফটোমেট্রি | 1-2 |
প্লাজমিড গঠন | অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস (AGE) | ||
কৈশিক ইলেক্ট্রোফোরেসিস (CE)-ঐচ্ছিক | |||
প্লাজমিড শনাক্ত করুন | সীমাবদ্ধতা এনজাইম সনাক্তকরণ/ AGE |
লিনিয়ারাইজেশন পদ্ধতির নমনীয় নির্বাচন
উচ্চ পুনরুদ্ধারের হার অর্জনের জন্য ডিএনএ নিষ্কাশন এবং পরিশোধন পদ্ধতির অপ্টিমাইজেশন।
80% এর বেশি গবেষণার জন্য প্লাজমিড নমুনার একটি সুপারহেলিকাল কনফর্মেশন রেট সহ কঠোর প্রক্রিয়া নিয়ন্ত্রণের মান।
পরীক্ষামূলক প্রয়োজন মেটাতে উচ্চ মান এবং উচ্চ দক্ষতা প্লাজমিড প্রস্তুতি এবং মান নিয়ন্ত্রণ পরিষেবা।
ইয়াওহাই বায়ো-ফার্মার পণ্য mCherry circRNA-কে উদাহরণ হিসেবে নিলে, ট্রান্সক্রিপশন টেমপ্লেট প্লাজমিড নমুনাগুলির (গবেষণা গ্রেড) সুপারকোয়েলড অনুপাত 70%-এর বেশি, যার রৈখিককরণ হার 100% এর কাছাকাছি।
mCherry circRNA একটি টেমপ্লেট হিসাবে লিনিয়ারাইজড প্লাজমিড দিয়ে প্রস্তুত করা হয় এবং 293T কোষে স্থানান্তরিত হয়। ট্রান্সফেকশনের 24 ঘন্টা পরে উচ্চ স্তরের ফ্লুরোসেন্স এক্সপ্রেশন (রেড ফ্লুরোসেন্স) সনাক্ত করা হয়, যা 48 ঘন্টা পরে উন্নত করা হবে এবং এখনও 7ম দিন এবং ট্রান্সফেকশনের 14 তম দিনে সনাক্ত করা যেতে পারে।
mCherry প্রোটিন স্থিরভাবে এবং দক্ষতার সাথে প্রকাশ করা হয়, এবং ট্রান্সক্রিপশনাল টেমপ্লেট বিশুদ্ধতা উচ্চ মানের সাথে circRNA ড্রাগ প্রোডাক্ট (DP) এর প্রয়োজন মেটাতে পারে।
mCherry circRNA-এর ভিট্রো এক্সপ্রেশনের বৈধতা