দুই-পদক্ষেপের এনজাইমেটিক ক্যাপিংয়ের সাথে তুলনা করে, এক-পদক্ষেপ সহ-ট্রান্সক্রিপশনাল ক্যাপিং পদ্ধতি উল্লেখযোগ্যভাবে প্রক্রিয়া প্রবাহকে কমাতে পারে। পদ্ধতিটি ফলাফল-ভিত্তিক এবং ইন ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন (IVT) প্রতিক্রিয়াতে ক্যাপ অ্যানালগ যুক্ত করা জড়িত। ট্রান্সক্রিপশনের শুরুতে ক্যাপ অ্যানালগগুলি প্রবর্তন করা যেতে পারে এবং ট্রান্সক্রিপশন সম্পূর্ণ হওয়ার পরে ক্যাপ গঠন সহ mRNA পাওয়া যেতে পারে। বর্তমান তৃতীয় প্রজন্মের ক্যাপ অ্যানালগগুলি বিপরীত ক্যাপিং এড়াতে পারে এবং ট্রান্সক্রিপশন পণ্যে সরাসরি ক্যাপ 1 কাঠামো যোগ করতে পারে।
ভিভো ইমিউনোজেনিসিটি এবং অনুবাদ দক্ষতায় mRNA-এর বিবেচনার জন্য, IVT প্রক্রিয়া প্রায়ই নির্দিষ্ট ধরণের পরিবর্তিত NTP গ্রহণ করে, এবং সাধারণ পরিবর্তিত নিউক্লিওটাইডগুলি হল সিউডোরিডাইন (Ψ), N1-মিথাইল-সিউডোরি-ডাইন (N1Ψ), এবং 5-মিথাইলসাইটোসিন (5mC) .
চিত্র: mRNA কো-ট্রান্সক্রিপশনাল এবং ক্যাপিং প্রতিক্রিয়ার চিত্র
সেবা | পরিষেবা বিশদ | প্রসবের সময়কাল (কাজের দিন) |
কো-ট্রান্সক্রিপশনাল ক্যাপিং | ইন ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশনাল রেসপন্স (ক্লিন ক্যাপ এনালগ) | 1-2 |
নিউক্লিওটাইড পরিবর্তন (Ψ/N1Ψ/5mC) | ||
DNA টেমপ্লেট অপসারণ (DNase I) | ||
IVT শর্ত অপ্টিমাইজেশান - ঐচ্ছিক | প্রতিক্রিয়া উপাদান নকশা এবং অপ্টিমাইজেশান | 3-7 |
একাধিক ঐচ্ছিক নিউক্লিওটাইড পরিবর্তন কৌশল প্রোটিনের অভিব্যক্তি উন্নত করতে পারে।
একটি উচ্চ ট্রান্সক্রিপশন অনুপাত এবং উচ্চ ক্যাপিং দক্ষতা অর্জন করুন।
95% এর বেশি ক্যাপিং রেট অর্জন করুন।
পরীক্ষামূলক পরিবেশ এবং ভোগ্য সামগ্রীতে কঠোরভাবে RNase নিয়ন্ত্রণ করে কার্যকরভাবে mRNA ক্ষয় রোধ করুন।
ইয়াওহাই বায়ো-ফার্মা একটি পরিপক্ক কো-ট্রান্সক্রিপশনাল ক্যাপিং প্রসেস প্ল্যাটফর্ম তৈরি করেছে, ক্লিন ক্যাপ অ্যানালগ ব্যবহার করে সরাসরি Cap1 কাঠামো যোগ করার জন্য বিপরীত ক্যাপিং এড়ানো। মানসম্মত নমুনা প্রাক-চিকিত্সা এবং কৈশিক ইলেক্ট্রোফোরেসিস (সিই) সনাক্তকরণের পরে, বর্ধিত সবুজ ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিন (ইজিএফপি) এমআরএনএর ক্যাপিং রেট 95% এর বেশি পৌঁছাতে পারে।
eGFP mRNA ক্যাপিং দক্ষতা 95% এর বেশি
কো-ট্রান্সক্রিপশনাল ক্যাপিং দ্বারা প্রস্তুত করা eGFP mRNA এবং mCherry mRNA যথাক্রমে 293T কোষে স্থানান্তরিত হয় এবং 48 ঘণ্টার পরে একটি শক্তিশালী ফ্লুরোসেন্ট সংকেত পরিলক্ষিত হয়, যা নির্দেশ করে যে mRNA 293T কোষে দক্ষতার সাথে প্রকাশ করা হয়েছে।
293T কোষে eGFP mRNA এবং mCherry mRNA এর প্রকাশ