Yaohai Bio-Pharma PIE সিস্টেম (এক্সন এবং ইনট্রনের সমান্তরাল) ভিত্তিক circRNA প্রস্তুত করে, যা টাইপ I ইনট্রনের সেলফ-স্প্লাইসিং ফাংশনের উপর নির্ভর করে যা RNA সাইক্লিকেশন অর্জন করে। PIE স্ট্রাকচার T4 td জিন বা মাছের tRNA প্রিকার্সর জিন ব্যবহার করে ডিজাইন করা হয় এবং ব্যবস্থাপনা হয় এইভাবে:
আরএনএ ইনট্রন এবং সাপোর্টিং এক্সন ফ্র্যাগমেন্টকে দুটি অংশে (5' টার্মিনাল এবং 3' টার্মিনাল) ভাগ করা হয়, যেখানে 5' টার্মিনাল সিকোয়েন্সটি লক্ষ্য সিকোয়েন্সের চূড়ান্ত অংশে স্থানান্তরিত হয়, 3' টার্মিনাল সিকোয়েন্সটি লক্ষ্য সিকোয়েন্সের আগে সন্নিবেশিত হয় এবং মাঝখানে লক্ষ্য জিন সিকোয়েন্সটি সন্নিবেশিত হয়।
GTP এর ক্যাটালিসিসের অধীনে, PIE সংরचনা ইনট্রন ছাড়া অন্যান্য সিকোয়েন্সের সাইক্লিজেশনে পরিচালিত হয়। সাইক্লিজেশনের হারের একটি যৌক্তিক উন্নয়ন পদক্ষেপের সাথে, Yaohai Bio-Pharma 4 kb পর্যন্ত সিকোয়েন্সের সাইক্লিজেশন অর্ধেকেরও বেশি 80% হারে করতে পারে।
চিত্র 1. PIE সিস্টেমের ভিত্তিতে circRNA এর বাইট্রো পরিসংখ্যান
প্রক্রিয়া | পছন্দসই সেবা | সেবা বিবরণ | আগে পাঠানোর সময় (কাজের দিন) |
circRNA সিকোয়েন্স ডিজাইন এবং অপটিমাইজেশন | কোডিং সিকোয়েন্সের ডিজাইন এবং অপটিমাইজেশন |
CDS সিকোয়েন্স এলাইনমেন্ট CDS কোডন অপটিমাইজেশন |
1 |
নন-কোডিং সিকোয়েন্সের ডিজাইন এবং অপটিমাইজেশন |
ইনট্রন এবং এক্সন সিকোয়েন্সের ডিজাইন এবং অপটিমাইজেশন হোমোলগাস আর্ম সিকোয়েন্সের ডিজাইন এবং অপটিমাইজেশন স্পেসার সিকোয়েন্সের ডিজাইন এবং অপটিমাইজেশন |
১-২ |
সার্কুলার RNA উপাদান | জৈবিক কার্যাবলি | অপ্টিমাইজেশন কৌশলগুলি | |
দুই-প্রান্তীয় ইনট্রন এবং এক্সন সিকোয়েন্স | ইনট্রনের বাইরের সিকোয়েন্সগুলির সার্কুলার হওয়ার জন্য GTP-ক্যাটালাইজড ইনট্রন সেলফ-স্প্লাইসিং। | T4 td জিন বা মাছের তেল tRNA প্রিকার্সর জিন অনুযায়ী ডিজাইন করা হয়েছে। | |
কোডিং | আইরেস | অন্তর্নিহিত রাইবোসোম চিহ্নিতকরণ সাইট যা সার্কুলার RNA-এর অনুবাদকে নিয়ন্ত্রণ করে। | ভিন্ন ভাইরাল উৎস থেকে অন্তর্নিহিত রাইবোসোম প্রবেশ সাইট (আইরেস) সিকোয়েন্সের স্ক্রীনিং, যেমন EMCV, CVB3 উৎস। |
CDS | প্রোটিন-কোডিং অঞ্চলসমূহ, এন্টিজেন, এন্টিবডি বা অন্যান্য কার্যকর প্রোটিন কোডিংয়ের জন্য সিকোয়েন্স। | কোডন অপটিমাইজেশন অনুবাদের মাত্রা বাড়ায়; কিছু অ-অপটিমাল কোডন প্রোটিন ফোল্ডিংয়ে ভূমিকা রাখতে পারে। | |
অ-কোডিং | অ-কোডিং সিকোয়েন্স | জিন বা প্রোটিন নিয়ন্ত্রণের জন্য লক্ষ্য মাইক্রোআরএনএ বা প্রোটিন। | মাইক্রোআরএনএ বা প্রোটিনের জন্য বিশেষ বাইন্ডিং সাইট লক্ষ্য করে বাইন্ডিং সাইটের সিকোয়েন্স পুনরাবৃত্তি করা যেতে পারে। |
যাওহাই বায়ো-ফার্মা নিয়ন্ত্রণ পণ্য হিসাবে এনহেন্সড গ্রিন ফ্লোরেসেন্ট প্রোটিন (eGFP) circRNA চালু করেছে, যা PIE সিস্টেমের উপর ভিত্তি করে RNA এর সাইক্লোজেশন অর্জন করে।
একটি সাধারণ ট্রান্সফেকশন রিজেন্ট ব্যবহার করে eGFP circRNA কে ২৯৩টি ঘূর্ণি করা হয়, এবং ২৪ ঘণ্টা পরে একটি eGFP (সবুজ) ফ্লোরেসেন্ট সিগন্যাল পরিলক্ষিত হয়, যা ৪৮ ঘণ্টা পরে বৃদ্ধি পায়। ট্রান্সফেকশনের ৭ম দিন এবং ১৪তম দিনেও ফ্লোরেসেন্ট সিগন্যাল পরিলক্ষিত হয়।
EGFP circRNA এর বাইরের ব্যঞ্জক অভিব্যক্তি