Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS) پر مبنی پپٹائڈ میپنگ ڈیٹا نیچے دیے گئے اور بازیائی پروٹین کی ابتدائی اور زیادہ آرڈر ساخت کے بارے میں بڑی مقدار کی جانکاری فراہم کرے گا، جن میں amino acid sequence coverage، بعد از ترجمہ تبدیلیاں (PTMs، مثلاً، glycosylation، oxidation، deamidation)، disulfide bonds، اتھر شامل ہیں۔
Yaohai Bio-Pharma آپ کے ہدف پروٹین کے لئے LC-MS سے پپٹائڈ میپنگ تحلیل خدمات پیش کرتا ہے، تاکہ پروٹین ساخت پر آپ کی تحقیق میں تیزی بناۓ جاسکے۔
ہم مختلف بڑے مolecules کی پروٹین سٹرکچرل کاریکٹرائزیشن میں شریک رہے ہیں، جن میں ریکومبنٹ سبیونٹ واکسن، نانوبائیز/VHHs/ سینگل-ڈومین اینٹی بڈیز (sdAbs)، اینٹی بڈی فریگمنٹس، هارمونز/پیپٹائیڈز، سائٹوکائنز، گروتھ فیکٹرز (GF)، انزایمز، کالاجینز، اور دیگر شامل ہیں۔
پیپٹائڈ میپنگ کے لئے تنظیمی ضروریات
ICHQ6B ہدایت نامہ میں تجویز کی گئی ہے، "پrouct کو مناسب انزائمس یا کیمیائی مواد کے ذریعہ گھٹک پیپٹائڈس میں تقسیم کیا جاتا ہے اور حاصل ہونے والے پیپٹائڈ ٹکڑے HPLC یا دیگر مناسب تحلیلی طریقہ کار سے تجزیہ کیا جاتا ہے۔ پیپٹائڈ ٹکڑوں کو جانتے وقت کے قدرتی طور پر استعمال کیے جانے والے طریقوں جیسے امینو اسید ترکیب کی تحلیل، N-ترمینل سیکوئنسنگ یا میس سپیکٹرومیٹری (MS) کو استعمال کرتے ہوئے جانتے ہیں۔ فعال مواد یا دوا کے پrouct (DP) کی پیپٹائڈ میپنگ ایک مناسب طریقہ تصدیق کرنے کے لئے اکثر استعمال کی جاتی ہے کہ ڈسایرڈ پrouct ساخت کو بیچ کی ریلیز کے لئے تصدیق کرنے کے لئے".
انالیٹیکل میتھڈز
| تجزیہ |
طریقے |
| پیپٹائیڈ میپنگ |
پروٹییز ڈجیسٹن اور مائع کروموگرافی-میس سپیکٹرومیٹری (LC-MS) |
تحلیلی طریقہ
1. ریڈکشن اور الکیلیشن
مقصد ڈسالفاڈائی برجیز کو کم کرنا اور پیدا ہونے والے آزاد تھائول کو بند کرنا ہے۔ ڈسالفاڈائی برجیز کو کم کرنے سے پروٹین کی ساخت کھل جاتی ہے، جس سے پروٹائیلائیک گدھایش میں زیادہ کارآمدی حاصل ہوتی ہے۔ یہ قدم بہت سی پروٹینوں کے لئے مفید ہے جن میں متعدد چینز ہوتی ہیں اور ان چینز کو ڈسالفاڈائی برجیز جوڑتا ہے (مثلًا منوسیٹکل انتی بডیز، mAbs)۔
پروٹین کو انزائمس کے ذریعے گدھانا
مقصد پروٹین کو پیپٹائیڈز میں توڑ دینا ہے۔ ہم نے انزائمس کا انتخاب پروٹین کے نظریہ سے مطابقت رکھنے والے تسلسل اور پروٹین کے نظریہ سے انزائمس کی گدھایش کے علم پر مبنی کیا۔ اس طرح انزائمس کا انتخاب کرتے ہوئے، بہترین پیپٹائیڈ میپنگ تجزیہ حاصل ہونا چاہئے۔
گدھے گئے پیپٹائیڈز کا تجزیہ آن لائن ریورس فیز-ہائی پرفارمنس لکوئیڈ کرومیٹوگرافی کا استعمال کرکے اولٹرا وائیولیٹ (UV) اور الیکٹروسپری-میس سپیکٹرومیٹرک ڈیٹیکشن (LC/ES-MS)۔
پولارٹی پر مبنی پیپٹائیڈ کو الگ کرنے کے لئے LC (ریورس فیز-LC)
جب پیپٹائڈ LC کالم سے باہر نکلتا ہے، تو میس سپیکٹرومیٹر میس کی معلومات اور فراگمنٹ آن ٹوگیذر جانچے گی، جو ہمیں ترتیب کی معلومات کو تعین کرنے میں مدد دیتی ہے۔ ہم ترتیب کی معلومات کو استعمال کرتے ہوئے پیپٹائڈ کی شناخت کو تصدیق کرتے ہیں اور ابتدائی معلومات فراہم کرتے ہیں۔
ہم LC کالم سے میس سپیکٹرومیٹر سرچینے میں داخل ہونے والے پیپٹائڈز سے بھی فراگمنٹیشن کی معلومات جانچ سکتے ہیں۔ مطالعہ کی ضروریات پر مبنی، یہ یا تو منتخبہ LC-MS/MS ہے یا غیر منتخبہ، جسے ٹینڈم MS کی صورت کے طور پر سمجھا جा سکتا ہے۔
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
