دوبارہ ترتیب دیے گئے پروٹینز میں نکلنے والے امینو ایسڈ سائیڈ چینز کی آکسیڈیشن عام طور پر دیکھی جاتی ہے، جیسے ٹرپٹوفان (Trp) اور میتھونین (Met)، جو پروٹینز کے فزیکو-کیمیائی خصوصیات کو بدل دیتی ہے۔ یہ تبدیلیاں متاثرہ پروٹینز کی زیستی کارکردگیوں کو بدلنے میں مدد کر سکتی ہیں، جیسے بنڈنگ کی ناکامی، انزایمی سرگرمی کی کمی، یا غیر متوقع طور پر تیز رفتار صافی۔ پروٹینز اکسیڈیٹیو ریکشنز کے لئے اہم مقصد ہیں کیونکہ وہ اکسیڈینٹس سے تیزی سے تفاعل کرتے ہیں اور سیلز، ایکسٹریسلر تیشر، اور بডی فلوئیڈز میں وفرت سے موجود ہوتے ہیں۔
اس لیے، پروٹین آکسیڈیشن کی نگرانی کامیاب بائیوفارمیسیوٹیکل ترقی کے لئے ضروری ہے۔
یاوہائی بائیو فارما امینو اسید آکسیڈیشن تجزیہ خدمات پیش کرتی ہے، جس کے ذریعے آپ لیکوئد کروماتوگرافی-مس سپیکٹرومیٹری (LC-MS) کے ذریعے امینو اسید آکسیڈیشن کو تعین کر سکتے ہیں۔
ہم مختلف بڑے مolecules کی پروٹین سtractural حیاتیات میں شریک رہے ہیں، جن میں Recombinant Subunit ویکسنز، Nanobodies/VHHs/Single-domain antibodies (sdAbs)، Antibody Fragments، Hormones/Peptides، Cytokines، Growth Factors (GF)، Enzymes، Collagens، اور دیگر شامل ہیں۔
امینو اسید آکسیڈیشن کے لئے تنظیمی ضروریات
ICH Q6B Guidelines کے مطابق، آکسیڈیڈ فارم کو کروماتوگرافی، الیکٹروفوریس اور/یا دیگر متعلقہ تحلیلی طریقوں (مثال کے طور پر، High Performance Liquid Chromatography (HPLC)، کیپیلری الیکٹروفوریس، ماس سپیکٹروسکوپی، Circular Dichroism) سے پتہ لگایا جا سکتا ہے اور حوالہ دیا جا سکتا ہے۔
انالیٹیکل میتھڈز
تجزیہ |
طریقے |
امینو اسید آکسیڈیشن |
LC-MS، Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) یا Hydrophobic Interaction Chromatography High Performance Liquid Chromatography (HIC-HPLC) اور ماس سپیکٹرومیٹری |
تحلیلی طریقہ عمل
1. نمونہ تیار کرنا
2. LC-MS
3. ڈیٹا تحلیل
ٹرپٹوفین (Trp) ریزڈو خصوصی طور پر اکسیڈیشن سے متاثر ہوتے ہیں کیونکہ عطری انڈول کے ساتھ واکنشی اکسیجن کے ذرات کی بہت زیادہ واقعیت ہوتی ہے۔ Trp ریزڈو کی اکسیڈیشن ممکن ہے جب وہ عام طور پر پروٹین کی تین بعدی ساخت میں چھپے ہوئے ہوتے ہیں، لیکن کسی حد تک آزاد ہوجاتے ہیں۔
لیکن جب Trp ریزڈو اکسیڈ ہوجاتے ہیں، تو وہ اصل Trp سے بہت مختلف خصوصیات والے مختلف منصوبوں میں تبدیل ہوسکتے ہیں۔ Trp اکسیڈیشن کا سب سے عام راستہ N-formylkynurenine کی تشکیل شامل کرتا ہے (وزن کی فرق: +32).
دوسرا عام طور پر اکسیڈ ہونے والے امینو ایسڈ میتھیونین ہے۔ Met ریزڈو کے سلفر اتم کو اکسیجن اتموں کو قبول کرنے کی صلاحیت ہوتی ہے جو sulfoxide (وزن کی فرق: +16) یا sulfone (وزن کی فرق: +32) کی تشکیل کرتے ہیں، اسی ترتیب سے۔ یہ ترمیم کافی عام ہے کیونکہ معمولی طور پر Met کی سطحی آزادی کی حد بہت زیادہ ہوتی ہے۔