مائع کرومیٹوگرافی-ماس سپیکٹرو میٹری (LC-MS) پر مبنی پیپٹائڈ میپنگ ڈیٹا مقامی اور دوبارہ پیدا ہونے والے پروٹینوں کے بنیادی اور اعلیٰ ترتیب کے ڈھانچے کے بارے میں معلومات کی ایک بڑی مقدار فراہم کرے گا، بشمول امینو ایسڈ کی ترتیب کی کوریج، پوسٹ ٹرانسلیشنل ترمیم (PTMs، مثال کے طور پر، glycosylation) ، آکسیکرن، ڈیامیڈیشن)، ڈسلفائیڈ بانڈز، وغیرہ۔
Yaohai Bio-Pharma LC-MS کے ذریعے آپ کے ٹارگٹ پروٹین کے لیے پیپٹائڈ میپنگ کے تجزیہ کی خدمات پیش کرتا ہے، تاکہ پروٹین کی ساخت پر آپ کی تحقیق کو تیز کیا جا سکے۔
ہم مختلف بڑے مالیکیولز کی پروٹین کی ساختی خصوصیات میں شامل رہے ہیں، بشمول ریکومبیننٹ سبونائٹ ویکسینز، نینو باڈیز/وی ایچ ایچز/ سنگل ڈومین اینٹی باڈیز (ایس ڈی اے بی ایس)، اینٹی باڈی فریگمنٹس، ہارمونز/پیپٹائڈس، سائٹوکائنز، گروتھ فیکٹرز (جی ایف)، انزائمز، کولاجز، وغیرہ
پیپٹائڈ میپنگ کے لیے ریگولیٹری تقاضے
ICHQ6B رہنما خطوط تجویز کرتا ہے، "مجرد پیپٹائڈز میں پروڈکٹ کے منتخب ٹکڑے کو مناسب انزائمز یا کیمیکلز کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا جاتا ہے اور نتیجے میں پیپٹائڈ کے ٹکڑوں کا HPLC یا دیگر مناسب تجزیاتی طریقہ کار کے ذریعے تجزیہ کیا جاتا ہے۔ پیپٹائڈ کے ٹکڑوں کو جہاں تک ممکن ہو ان تکنیکوں کا استعمال کرتے ہوئے شناخت کیا جانا چاہیے جیسے کہ امائنو ایسڈ کمپوزیشن اینالیسس، این ٹرمینل سیکوینسنگ یا ماس سپیکٹرو میٹری (MS)۔ مناسب طریقے سے تصدیق شدہ طریقہ استعمال کرتے ہوئے فعال مادہ یا منشیات کی مصنوعات (DP) کی پیپٹائڈ میپنگ ایک ایسا طریقہ ہے جو اکثر بیچ کی رہائی کے لیے مطلوبہ پروڈکٹ کی ساخت کی تصدیق کے لیے استعمال ہوتا ہے۔
تجزیاتی طریقے
| تجزیہ |
طریقے |
| پیپٹائڈ میپنگ |
پروٹیز ہاضمہ اور مائع کرومیٹوگرافی-ماس سپیکٹرو میٹری (LC-MS) |
تجزیاتی طریقہ کار
1. کمی اور الکیلیشن
اس کا مقصد ڈسلفائیڈ پلوں کو کم کرنا اور پیدا ہونے والے فری تھیول کو روکنا ہے۔ ڈسلفائڈ پلوں کی کمی پروٹین کی ساخت کو کھولنے میں مدد کرتی ہے جو پروٹولیٹک عمل انہضام کو زیادہ موثر بناتی ہے۔ یہ قدم ملٹی چین پروٹین کے معاملے میں زنجیروں کے درمیان پلوں کو بھی توڑ دے گا جن میں زنجیروں کو جوڑنے والے ڈسلفائیڈ پل ہوتے ہیں (جیسے مونوکلونل اینٹی باڈیز，mAbs)۔
2. خامروں کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین کا ہاضمہ
اس کا مقصد پروٹین کو پیپٹائڈس میں توڑنا ہے۔ ہم نے پروٹین کی نظریاتی ترتیب اور خامروں کے ذریعے پروٹین کے نظریاتی عمل انہضام کے علم پر انزائمز کی بنیاد کا انتخاب کیا۔ اس طرح سے انزائمز کا انتخاب، بہترین پیپٹائڈ میپنگ تجزیہ کا نتیجہ ہونا چاہیے۔
3. ہضم شدہ پیپٹائڈس کا تجزیہ الٹرا وائلٹ (UV) اور الیکٹرو سپرے ماس سپیکٹرو میٹرک ڈیٹیکشن (LC/ES-MS) کے ساتھ آن لائن ریورس فیز-ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی کا استعمال۔
LC کا استعمال کرتے ہوئے قطبیت پر مبنی پیپٹائڈ علیحدگی (ریورس فیز-LC)
جیسا کہ پیپٹائڈ ایل سی کالم سے خارج ہوتا ہے، ماس اسپیکٹرومیٹر فریگمنٹ آئن کی معلومات کے ساتھ بڑے پیمانے پر معلومات پیدا کرے گا، جو ہمیں ترتیب کی معلومات کا تعین کرنے کی اجازت دیتا ہے۔ ہم پیپٹائڈ کی شناخت کی تصدیق اور بنیادی معلومات فراہم کرنے کے لیے ترتیب کی معلومات کا استعمال کرتے ہیں۔
ہم پیپٹائڈس سے فریگمنٹیشن کی معلومات بھی تیار کر سکتے ہیں جب وہ LC کالم سے ماس سپیکٹرو میٹر سورس میں داخل ہوتے ہیں۔ مطالعہ کی ضروریات پر منحصر ہے، یہ یا تو سلیکٹیو LC-MS/MS ہے یا غیر سلیکٹیو، جسے ٹینڈم MS کی ایک شکل سمجھا جا سکتا ہے۔
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
نہیں
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
