N-glycosylation سائٹ پر قبضہ glycoproteins کی ایک جسمانی خصوصیت ہے اور بنیادی طور پر N-glycan پیدا کرتی ہے۔ Yaohai Bio-Pharma کی N-glycosylation سائٹ پر قبضے کے تجزیے کی خدمت مائع کرومیٹوگرافی-Electrospray Ionization Mass Spectrometry-Mass Spectrometry (LC-ESI-MS/MS) کا استعمال کرتے ہوئے ہضم، رہائی، افزودگی اور تجزیہ کے ذریعے کی جاتی ہے۔
ہم مختلف بڑے مالیکیولز کی پروٹین کی ساختی خصوصیات میں شامل رہے ہیں، بشمول ریکومبیننٹ سبونائٹ ویکسینز، نینو باڈیز/وی ایچ ایچز/ سنگل ڈومین اینٹی باڈیز (ایس ڈی اے بی ایس)، اینٹی باڈی فریگمنٹس، ہارمونز/پیپٹائڈس، سائٹوکائنز، گروتھ فیکٹرز (جی ایف)، انزائمز، کولاجز، وغیرہ
N-glycosylation سائٹ پر قبضے کے لیے ریگولیٹری تقاضے
ICH Q6B رہنما خطوط کے مطابق، "گلائکوپروٹینز کے لیے، کاربوہائیڈریٹ مواد (غیر جانبدار شکر، امینو شکر، اور سیالک ایسڈ) کا تعین کیا جاتا ہے۔ مزید برآں، کاربوہائیڈریٹ چینز کی ساخت، اولیگوساکرائیڈ پیٹرن (اینٹینری پروفائل)، اور پولی پیپٹائڈ چین کی گلائکوسیلیشن سائٹ (سائٹس) کا ممکنہ حد تک تجزیہ کیا جاتا ہے۔
تجزیاتی طریقہ
| تجزیہ |
طریقے |
| N-glycosylation سائٹ پر قبضہ |
LC-MS deglycosylase اور protease ہضم کے بعد |
طریقہ کار
1. چھوٹے پیپٹائڈ کے ٹکڑے پیدا کرنے کے لیے پروٹین کا پروٹین ہاضمہ۔
2. Endoglycosidase H یا PNGase F کا استعمال کرتے ہوئے N-glycan کی رہائی۔ Endoglycosidase H N-linked glycans کے بنیادی حصے میں دو GlcNAc باقیات کے درمیان بندھن کو ختم کرتا ہے، جبکہ PNGase F ایک گلائکوامیڈیس ہے جو GlcNAc اور Asn کے درمیان بانڈ کو الگ کرتا ہے، مکمل طور پر آزاد ہوتا ہے۔ شوگر چین اور Asn کو Asp میں 1-Da کے بڑے پیمانے پر اضافے کے ساتھ تبدیل کرنا۔
3. HILIC کے ذریعے N-glycopeptide کی افزودگی (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)
4. LC-ESI-MS/MS کا استعمال کرتے ہوئے N-linked glycosylation سائٹ کے قبضے کا تجزیہ۔
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
نہیں
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
