Deblocarea secretelor extracției de plasmide de înaltă calitate România

Extracția plasmidelor este crucială pentru cercetători. Ca vectori genetici, plasmidele sunt vitale în cercetarea vaccinurilor și terapia genică, acolo unde calitatea contează. Factorii cheie de calitate includ proporția supercoiled și conținutul de endotoxine. Reglementările variază: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, cu <5% ADN liniar/circular deschis. Clienții preferă adesea ≥95% supercoiled. Nivelurile de endotoxine sunt: ​​cercetare (>50 EU/µg), transfecție (<50 EU/µg) și fără endotoxine (<0.1 EU/µg).

ADN plasmidic supraînfăşurat

Plasmidele de la Escherichia coli includ ADN supercoiled (SC), circular deschis (OC) și liniar (L). Proporția mare de SC crește eficiența transfecției și expresia. De exemplu, transfecția unei plasmide SC de 85.45% este de 2.5 ori mai mare, iar expresia HGF a plasmidei SC de 93.28% este de 1.8 ori mai mare, confirmând superioritatea ADN-ului SC.

ADN-ul circular deschis: Când o catenă de ADN dublu catenar se rupe, structura supercoilată se slăbește, formând o plasmidă circulară deschisă cu un volum mai mare care migrează cel mai lent în timpul electroforezei și este poziționată în partea de sus.

ADN liniar: Când ambele catenele de ADN plasmidic se rupe, se formează o structură liniară, cu un volum relativ mai mic, care migrează mai repede decât ADN-ul circular deschis, dar mai lent decât ADN-ul supraînrulat, poziționat pe locul al doilea.

ADN supercoiled: două elice se întrepătrund, răsucindu-se într-o structură supercoiled bazată pe elica ADN. Are cel mai mic volum și migrează cel mai repede în timpul electroforezei, poziționat în partea de jos.

Analiza cantitativă a proporției supercoilate

Laboratoarele folosesc electroforeză pe gel de agaroză (AGE) și Gel-Pro Analyzer pentru a evalua proporția supercoiled prin imagini de electroforeză. O imagine arată 97.539% ADN SC, în timp ce alta arată 63.833% SC și 36.167% ADN OC (ADN liniar nu este vizibil).

Secretul endotoxinei din plasmide

Endotoxina este o componentă a stratului exterior al peretelui celular al bacteriilor Gram-negative, eliberată după moartea bacteriilor sau după liză, care conține lipopolizaharidă toxică A. În timpul extracției plasmidei, endotoxina intră în soluția de liză, afectând eficiența transfecției și declanșând răspunsuri imune nespecifice, ducând la fals pozitive în experimente.

Analiza cantitativă și calitativă a endotoxinei

Testul lizat de amebocite Limulus (LAL) detectează endotoxina prin aglutinare cu acid 2-ceto-3-deoxioctonic (KDO) în lipopolizaharidă (LPS). Este calitativ și semi-cantitativ, indicând prezența endotoxinei prin coagulare sau schimbarea culorii atunci când este amestecat cu probe.

Yaohai Bio-Pharma oferă plasmide supercoilate fără endotoxine. Externalizarea către Yaohai crește eficiența transfecției și a expresiei. Plasmidele eliberate au o proporție SC ≥95% (în medie 85%±10%) și niveluri de endotoxină ≤0.1, ≤0.01 sau ≤0.005 EU/μg.

De asemenea, căutăm în mod activ parteneri instituționali sau individuali la nivel mondial. Oferim cea mai competitivă compensație din industrie. Dacă aveți întrebări, vă rugăm să nu ezitați să ne contactați: [email protected]