Procesul de fabricație al ARNm eGFP

Producția de ARNm eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) implică o serie de tehnici de biologie moleculară pentru a genera o moleculă funcțională de ARN care codifică expresia eGFP. În domeniul eGFP mRNA, Yaohai Bio-Pharma a acumulat o vastă experiență în satisfacerea nevoilor specifice ale clienților. Folosind experiența noastră, am sintetizat fluxul de proces pentru producerea ARNm EGFP.

1. Clonarea genei eGFP: Pentru a obține secvența genei care codifică eGFP. Această genă este de obicei donată dintr-un vector plasmidic preexistent sau sintetizată artificial pe baza secvenței de nucleotide cunoscute. Gena donată este apoi verificată prin secvențiere pentru a asigura acuratețea.
2. Optimizarea genelor pentru exprimare: Pentru o exprimare optimă în sistemul țintă (de exemplu, celule de mamifere, bacterii sau sisteme de transcripție in vitro), gena eGFP poate suferi optimizarea codonilor. Aceasta presupune înlocuirea codonilor rari din secvența originală cu codoni folosiți mai frecvent în organismul gazdă, crescând șansele unei traduceri eficiente.
3. In vitro Pregătirea șablonului de transcriere: Odată ce gena optimizată este gata, este încorporată într-un vector adecvat, adesea o plasmidă, care conține elemente de reglare necesare transcripției (de exemplu, o secvență promotor). Această plasmidă servește ca șablon pentru transcripția in vitro.
4. In vitro Transcriere: Folosind șablonul plasmid preparat, transcripția in vitro este efectuată pentru a sintetiza ARNm eGFP. Acest proces implică utilizarea enzimelor ARN polimerază, care recunosc secvența promotorului și inițiază transcripția, producând o catenă de ARN complementară matriței ADN. În funcție de aplicația dorită, ARNm poate fi acoperit, poliadenilat și/sau modificat pentru a îmbunătăți stabilitatea și eficiența translației.
5. Purificare și control al calității: ARNm-ul eGFP sintetizat este apoi purificat pentru a elimina orice contaminanți, inclusiv ADN-ul, proteinele și nucleotidele libere. Metodele de purificare pot include electroforeza pe gel, cromatografia pe coloană sau separarea pe bază de perle. După purificare, ARNm este analizat pentru calitate, inclusiv concentrație, puritate și integritate, folosind tehnici precum spectrofotometria UV-Vis și electroforeza pe gel.
6. Depozitare și livrare: ARNm eGFP purificat este de obicei depozitat la temperaturi scăzute pentru a menține stabilitatea. Pentru utilizare experimentală, ARNm poate fi livrat în celule folosind diferite metode, inclusiv electroporare, lipofecție sau vectori virali, în funcție de aplicația specifică și tipul de celulă țintă.
7. Exprimare și verificare: Odată în interiorul celulei, ARNm eGFP este tradus în proteina fluorescentă verde îmbunătățită, care poate fi vizualizată folosind microscopia cu fluorescență. Acest lucru permite verificarea producției, livrării și exprimării cu succes a ARNm.

În rezumat, producția de ARNm eGFP implică clonarea genei, optimizarea acesteia pentru exprimare, pregătirea unui șablon de transcripție in vitro, efectuarea reacției de transcripție, purificarea ARNm rezultat și, în final, livrarea în celule pentru exprimare și verificare.

De asemenea, căutăm în mod activ parteneri instituționali sau individuali la nivel mondial. Oferim cea mai competitivă compensație din industrie. Dacă aveți întrebări, vă rugăm să nu ezitați să ne contactați: [email protected]