Procesul de producție al mRNA-ului eGFP

Producerea mRNA-ului eGFP (Proteină Fluorescentă Verde Enhansată) implică o serie de tehnici de biologie moleculară pentru a genera o molécule de RNA funcțională care codifică expresia eGFP. În domeniul mRNA-ului eGFP, Yaohai Bio-Pharma a acumulat o experiență extensivă în a satisface nevoile specifice ale clientelor. Bazați pe această experiență, am sintetizat fluxul de proces pentru producerea mRNA-ului EGFP.

1. Clonarea genului eGFP : Acesta este folosit pentru a obține secvența genetică care codifică eGFP. Acest gen este de obicei clonat dintr-un vector plasmidic preexistent sau sintetizat artificial pe baza secvenței de nucleotizi cunoscute. Genul clonat este apoi verificat prin secvențare pentru a se asigura de acuratețe.
2. Optimizarea genului pentru expresie : Pentru expresie optimală în sistemul țintă (de exemplu, celule mamiferiene, bacterii sau sisteme de transcripție in vitro), genul eGFP poate submina o optimizare a codonilor. Aceasta implică înlocuirea codonilor rari din secvența originală cu altele mai frecvent utilizate în organismul gazdă, crescând probabilitatea unei traduceri eficiente.
3. In vitro Prepararea șablonului de transcripție : Odată ce genul optimizat este gata, acesta este incorporat într-un vector potrivit, adesea un plasmid, care conține elemente regulate necesare pentru transcripție (de exemplu, o secvență promotor). Acest plasmid servește ca șablon pentru transcripția in vitro.
4. In vitro Transcripție : Se efectuează o transcripție in vitro folosind plasmida preparată pentru a sintetiza mRNA eGFP. Acest proces implică utilizarea enzimelor RNA polymerase, care recunosc secvența promotor și inițiază transcripția, producând un șir de RNA complementary la șablonul DNA. În funcție de aplicația dorită, mRNA poate fi capat, poliadenilat și/sau modificat pentru a crește stabilitatea și eficiența traducerii.
5. Purificare și Control Calitate : mRNA eGFP sintetizat este apoi purificat pentru a elimina orice contaminanți, inclusiv DNA, proteine și nucleezide libere. Metodele de purificare pot include electrofoza gel, cromatografia pe coloană sau separarea bazată pe mici particule magnetice. După purificare, mRNA este analizat în ceea ce privește calitatea, inclusiv concentrația, pureța și integritatea, folosind tehnici precum spectrofotometria UV-Vis și electrofoza gel.
6. Stocare și Livrare : mRNA-ul eGFP purificat este stocat de obicei la temperaturi mici pentru a menține stabilitatea. Pentru utilizarea experimentală, mRNA-ul poate fi introdus în celule folosind diferite metode, inclusiv electroporație, lipofecție sau vectori virali, în funcție de aplicația specifică și de tipul de celulă țintă.
7. Expresie și Verificare : Odată în interiorul celulei, mRNA-ul eGFP este tradus în proteină fluorescentă verde îmbunătățită, care poate fi vizualizată folosind microscopie fluorescență. Acest lucru permite verificarea producției reușite a mRNA-ului, livrării și expresiei.

În concluzie, producerea mRNA-ului eGFP implică clonarea genului, optimizarea acestuia pentru expresie, pregătirea unui șablon pentru transcripție in vitro, efectuarea reacției de transcripție, purificarea mRNA-ului rezultat și, în final, introducerea lui în celule pentru expresie și verificare.

Cautăm activ parteneri instituționali sau individuali la nivel global. Ofertăm cea mai competitivă compensație din industrie. Dacă aveți întrebări, nu ezitați să ne contactați: [email protected]