Productieproces van eGFP mRNA

De productie van eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA omvat een reeks moleculaire biologietechnieken om een functionele RNA-molecuul te genereren die codeert voor de expressie van eGFP. Op het gebied van eGFP mRNA heeft Yaohai Bio-Pharma uitgebreide ervaring opgedaan in het voldoen aan de specifieke behoeften van klanten. Met behulp van onze ervaring hebben we het proces voor de productie van EGFP mRNA samengevat.

1. Klonen van de eGFP-gena : Om de genesequentie te verkrijgen die codeert voor eGFP. Dit gen wordt doorgaans gekloond vanuit een bestaande plasmidvector of kunstmatig gesynthetiseerd op basis van de bekende nucleotidesequentie. Het gekloonde gen wordt vervolgens gecontroleerd door sequencering om nauwkeurigheid te waarborgen.
2. Genoptimalisatie voor expressie : Voor optimale expressie in het doelsysteem (bijv. zoogdiercellen, bacteriën of in vitro transscriptiesystemen) kan de eGFP-gena onderworpen worden aan codonoptimalisatie. Dit houdt in dat zeldzame codons in de oorspronkelijke volgorde worden vervangen door vaak gebruikte codons in het gastorganisme, wat de kans op efficiënte translatie vergroot.
3. In vitro Transcriptietemplaatvoorbereiding : Zodra de geoptimaliseerde gen klaar is, wordt het ingebouwd in een geschikte vector, vaak een plasmid, dat regulatielelementen bevat die nodig zijn voor transcriptie (bijv. een promotorvolgorde). Dit plasmid dient als sjabloon voor in vitro transcriptie.
4. In vitro Transcriptie : Met behulp van het voorbereide plasmidtemplate wordt in vitro transscriptie uitgevoerd om eGFP mRNA te synthetiseren. Dit proces vereist het gebruik van RNA polymerase-enzymen, die de promotorsequentie herkennen en transscriptie initiëren, waardoor een complementaire RNA-strand aan de DNA-template wordt geproduceerd. Afhankelijk van de gewenste toepassing kan de mRNA worden afgedekt, polyadenyleerd en/of gemodificeerd om stabiliteit en vertaalkwaliteit te verbeteren.
5. Purificatie en Kwaliteitscontrole : De gesynthetiseerde eGFP mRNA wordt vervolgens gezuiverd om alle verontreinigingen, inclusief DNA, eiwitten en vrije nucleotiden, te verwijderen. Purificatiemethoden kunnen gel-electroforese, kolomchromatografie of scheidingsmethoden op basis van deeltjes omvatten. Na purificatie wordt de mRNA geanalyseerd op kwaliteit, waaronder concentratie, zuiverheid en integriteit, met technieken zoals UV-Vis spectofotometrie en gel-electroforese.
6. Opslag en Levering : De zuiverde eGFP mRNA wordt doorgaans op lage temperaturen opgeslagen om stabiliteit te behouden. Voor experimenteel gebruik kan de mRNA worden geïntroduceerd in cellen met verschillende methoden, waaronder elektroporatie, lipofectie of virale vectoren, afhankelijk van de specifieke toepassing en celtype.
7. Expressie en Verificatie : Zodra binnenin de cel, wordt de eGFP mRNA omgezet in het versterkte groene fluorescerende eiwit, dat g visualiseerd kan worden met behulp van fluorescencemicroscopie. Dit maakt het mogelijk om succesvolle mRNA productie, levering en expressie te verifiëren.

Samenvattend betreft de productie van eGFP mRNA het klonen van de gen, het optimaliseren ervan voor expressie, het voorbereiden van een in vitro transcriptietemplaat, het uitvoeren van de transcriptiereactie, het zuiveren van de resulterende mRNA, en uiteindelijk het introduceren in cellen voor expressie en verificatie.

Wij zoeken ook actief naar instellingen of individuen als wereldwijde partners. Wij bieden de meest concurrerende vergoeding in de industrie. Als u vragen heeft, aarzel dan niet om contact met ons op te nemen: [email protected]