Productieproces van eGFP mRNA

De productie van eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA omvat een reeks moleculair-biologische technieken om een ​​functioneel RNA-molecuul te genereren dat codeert voor de expressie van de eGFP. Op het gebied van eGFP mRNA heeft Yaohai Bio-Pharma uitgebreide ervaring opgedaan in het inspelen op de specifieke behoeften van klanten. Door gebruik te maken van onze ervaring hebben we de processtroom voor het produceren van EGFP mRNA gesynthetiseerd.

1. Het klonen van het eGFP-gen: Het verkrijgen van de gensequentie die codeert voor eGFP. Dit gen wordt doorgaans gekloond van een reeds bestaande plasmidevector of kunstmatig gesynthetiseerd op basis van de bekende nucleotidesequentie. Het gekloonde gen wordt vervolgens geverifieerd door middel van sequentiebepaling om de nauwkeurigheid te garanderen.
2. Genoptimalisatie voor expressie: Voor optimale expressie in het doelsysteem (bijv. zoogdiercellen, bacteriën of in vitro transcriptiesystemen) kan het eGFP-gen codonoptimalisatie ondergaan. Dit houdt in dat zeldzame codons in de oorspronkelijke sequentie worden vervangen door codons die vaker worden gebruikt in het gastorganisme, waardoor de kans op efficiënte vertaling toeneemt.
3. In vitro Voorbereiding van transcriptiesjabloon: Zodra het geoptimaliseerde gen klaar is, wordt het opgenomen in een geschikte vector, vaak een plasmide, die regulerende elementen bevat die nodig zijn voor transcriptie (bijv. een promotersequentie). Deze plasmide dient als een template voor in vitro transcriptie.
4. In vitro Transcriptie: Met behulp van de voorbereide plasmide-template wordt in vitro transcriptie uitgevoerd om eGFP mRNA te synthetiseren. Dit proces omvat het gebruik van RNA-polymerase-enzymen, die de promotersequentie herkennen en transcriptie initiëren, waardoor een complementaire RNA-streng aan de DNA-template wordt geproduceerd. Afhankelijk van de gewenste toepassing kan het mRNA worden afgedekt, gepolyadenyleerd en/of gemodificeerd om de stabiliteit en translatie-efficiëntie te verbeteren.
5. Zuivering en kwaliteitscontrole: Het gesynthetiseerde eGFP mRNA wordt vervolgens gezuiverd om alle verontreinigingen te verwijderen, waaronder DNA, eiwitten en vrije nucleotiden. Zuiveringsmethoden kunnen gelelektroforese, kolomchromatografie of op kralen gebaseerde scheiding omvatten. Na zuivering wordt het mRNA geanalyseerd op kwaliteit, waaronder concentratie, zuiverheid en integriteit, met behulp van technieken zoals UV-Vis spectrofotometrie en gelelektroforese.
6. Opslag en levering: Het gezuiverde eGFP mRNA wordt doorgaans opgeslagen bij lage temperaturen om de stabiliteit te behouden. Voor experimenteel gebruik kan het mRNA in cellen worden afgeleverd met behulp van verschillende methoden, waaronder elektroporatie, lipofectie of virale vectoren, afhankelijk van de specifieke toepassing en het doelceltype.
7. Expressie en verificatie: Eenmaal in de cel wordt het eGFP mRNA vertaald in het verbeterde groene fluorescerende eiwit, dat kan worden gevisualiseerd met behulp van fluorescentiemicroscopie. Dit maakt het mogelijk om succesvolle mRNA-productie, -levering en -expressie te verifiëren.

Samengevat omvat de productie van eGFP mRNA het klonen van het gen, het optimaliseren ervan voor expressie, het voorbereiden van een in vitro transcriptiesjabloon, het uitvoeren van de transcriptiereactie, het zuiveren van het resulterende mRNA en het ten slotte afleveren ervan in cellen voor expressie en verificatie.

We zijn ook actief op zoek naar institutionele of individuele mondiale partners. Wij bieden de meest concurrerende verloning in de branche. Als u vragen heeft, neem dan gerust contact met ons op: [email protected]