Methoden voor het bevorderen van reporter-RNA-modificatie

Bij het kiezen welke methode van reporter mRNA modificaties de voorkeur heeft, is er geen definitief antwoord, aangezien elke methode en elk reportergen zijn eigen voordelen en toepasbare scenario's heeft. Hier zijn enkele veelvoorkomende mRNA modificatiemethoden en reportergenen, samen met hun kenmerken en geschiktheid.

mRNA-modificatiemethoden

Methylering:

1. m6A: Geassocieerd met mRNA-stabiliteit, splicing, translatie en miRNA-verwerking. Detectie-uitdagingen omvatten antilichaamselectie en lokalisatie.
2. 5' Kap Nm: Verbetert stabiliteit, splicing, polyadenylatie en nucleaire export. Helpt eigen RNA te onderscheiden van vreemd RNA.
3. Pseudouridylatie: Verandert codons, verbetert stabiliteit en reageert op stress. Gekatalyseerd door pseudouridine synthases.

Introducties van niet-natuurlijke nucleotiden:

1. Geïntroduceerd tijdens transcriptie met een dubbele chemische modificatiestrategie. Het verbetert stabiliteit, efficiëntie en eiwitexpressie.

Verslaggever genen

1. Groen Fluorescerend Proteïne Gen (GFP): Voordelen: Gemakkelijk te detecteren, stabiele fluorescentie-eigenschappen, niet-toxisch voor cellen, geschikt voor live cell imaging. Nadelen: Beperkte fluorescentie-intensiteit.
2. Verbeterd groen fluorescerend eiwit (eGFP)Voordelen: Meer dan 6 keer helderder dan wildtype GFP, waardoor het geschikter is als reportergen voor het bestuderen van genexpressie, regulatie, celdifferentiatie en eiwitlokalisatie en -transport binnen organismen.
3. Rode fluorescerende eiwitten (bijv. mCherry): Voordelen: Langere excitatie- en emissiegolflengten, wat resulteert in een lagere achtergrond tijdens intracellulaire beeldvorming, uitstekende fluorescentiehelderheid en fotostabiliteit, en lagere cellulaire toxiciteit. Nadelen: Wordt mogelijk niet zo vaak gebruikt als GFP in bepaalde experimentele omstandigheden.
4. Vuurvlieg Luciferase: Voordelen: In aanwezigheid van ATP, magnesiumionen en zuurstof kan het de oxidatie van luciferine in oxyluciferine katalyseren, wat bioluminescentie uitzendt. Het is geschikt voor gebruik als controle om de translatie-efficiëntie van doelgenen in zoogdiercellen, celviabiliteit en in vivo beeldvormingstests te bestuderen.

Conclusie

Bij het kiezen van welke methode van reporter mRNA modificaties de voorkeur heeft, hangt het af van specifieke experimentele doelstellingen, onderzoeksachtergronden en experimentele omstandigheden. Als bijvoorbeeld een hoge gevoeligheid vereist is, kan eGFP een betere keuze zijn. Als beeldvorming bij langere golflengten nodig is om achtergrondinterferentie te verminderen, kunnen rode fluorescerende eiwitten zoals mCherry geschikter zijn. Bovendien kan op basis van de specifieke modificatiebehoeften van mRNA (bijv. het verbeteren van de stabiliteit, het verbeteren van de translatie-efficiëntie) de overeenkomstige modificatiemethode worden geselecteerd.

Als de eerste en grootste CRDMO voor microbiële biologische producten in Groot-China biedt Yaohai Bio-Pharma op maat gemaakte totaaloplossingen of afzonderlijke diensten, variërend van RNA-synthese, stamengineering en -constructie, upstream- en downstream-procesontwikkeling tot GMP- of niet-GMP-niveau productie van geneesmiddelen en fill & finish-diensten voor diverse modaliteiten, zoals mRNA, circRNA, plasmide-RNA, recombinante eiwitten, peptiden, enzymen, enkelvoudige domeinantilichamen en VLP's voor menselijk en veterinair gebruik.

Yaohai Bio-Pharma is ook actief op zoek naar institutionele of individuele wereldwijde partners en biedt de meest concurrerende compensatie in de industrie. Als u vragen heeft, neem dan gerust contact met ons op: [email protected]