Advocaat voor Methoden van Reporter RNA-modificatie

Bij het kiezen welke methode voor mRNA-modificatie van reporter preferabel is, bestaat er geen definitief antwoord, omdat elke methode en elke reporter-gene zijn eigen voordelen en toepasbare scenario's heeft. Hieronder staan enkele veelgebruikte mRNA-modificatiemethoden en reporter-genen, samen met hun kenmerken en geschiktheid.

mRNA-modificatiemethoden

Methylering:

1. m6A : Gerelateerd aan mRNA-stabiliteit, splicing, translatie en miRNA-verwerking. Detectieuitdagingen omvatten抗体selectie en localisatie.
2. 5' Cap Nm : Verhoogt stabiliteit, splicing, polyadenylatie en nucleaire export. Helpt onderscheiden tussen zelf-RNA en vreemde RNA.
3. Pseudouridyliering : Wijzigt codons, verhoogt stabiliteit en reageert op stress. Geëncymeerd door pseudouridine synthasen.

Introductie van niet-natuurlijke nucleotiden:

1. Ingevoerd tijdens de transcriptie met een dubbele chemische modificatiestrategie. Dit verbetert stabiliteit, efficiëntie en eiwitranscriptie.

Reporter Genen

1. Groene Fluorescerende Eiwit Gen (GFP) : Voordelen: Makkelijk te detecteren, stabiele fluorescerende eigenschappen, niet giftig voor cellen, geschikt voor livecelimaging. Nadelen: Beperkte fluorescente intensiteit.
2. Verbeterde Groene Fluorescerende Eiwitten (eGFP) : Voordelen: Meer dan 6 keer zo helder als het wilde type GFP, waardoor het geschikter is als reporter gen voor het bestuderen van genexpressie, regulatie, celifferentiatie en eiwitlocalisatie en -transport binnen organismen.
3. Rode Fluorescerende Eiwitten (bijv., mCherry) : Voordelen: Langere opwekking- en emissiegolflengtes, wat resulteert in minder achtergrondtijdens intracellulaire imaging, uitstekende fluorescerende helderheid en fotostabiliteit, en lagere celtoxiciteit. Nadelen: Mogelijk minder vaak gebruikt dan GFP onder bepaalde experimentele omstandigheden.
4. Vuurvlieg Luciferase : Voordelen: In tegenwoordigheid van ATP, magnesium-ionen en zuurstof kan het de oxidatie van luciferine tot oxyluciferine katalyseren, met emissie van bioluminescentie. Het is geschikt om te worden gebruikt als een controle om de vertaalkunde van doelgenen in mammacellen, cellevensvatbaarheid en in vivo imaging-assays te bestuderen.

Conclusie

Bij het kiezen welke methode van reporter mRNA-modificaties voorkeur verdient, hangt dit af van specifieke experimentele doelen, onderzoeksachtergronden en experimentele voorwaarden. Bijvoorbeeld, als er een hoge gevoeligheid vereist wordt, kan eGFP een betere keuze zijn. Als beeldvorming op langere golflengtes nodig is om achtergrondstoren te verminderen, kunnen rode fluorescente eiwitten zoals mCherry geschikter zijn. Daarnaast, gebaseerd op de specifieke modificatiebehoeften van mRNA (bijvoorbeeld, stabiliteit verbeteren, vertaalkunde efficiëntie verbeteren), kan de overeenkomstige modificatiemethode worden geselecteerd.

Als de eerste en grootste mikrobiële biologische CRDMO in Groot-China biedt Yaohai Bio-Pharma volledige op maat gemaakte oplossingen of losse diensten, variërend van RNA-synthese, stamontwerp en -constructie, ontwikkeling van upstream- en downstream-processen, tot GMP-of non-GMP-niveau productiemiddelenfabricage en vullingsdiensten voor diverse modaliteiten zoals mRNA, circRNA, plasmid RNA, recombinante eiwitten, peptiden, enzymen, enkel domeinanticorpsen en VLP's voor zowel menselijk als veterinaire gebruik.

Yaohai Bio-Pharma zoekt ook actief naar globale partners, zowel instellingen als individuen, en biedt de meest competitieve vergoeding in de branche. Als u vragen heeft, aarzel dan niet om contact met ons op te nemen: [email protected]