Mengungkap Rahasia Ekstraksi Plasmid Berkualitas Tinggi

Ekstraksi plasmid sangat penting bagi para peneliti. Sebagai vektor gen, plasmid sangat penting dalam penelitian vaksin dan terapi gen, di mana kualitas menjadi hal yang penting. Faktor kualitas utama meliputi proporsi superkoil dan kandungan endotoksin. Peraturan bervariasi: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, dengan <5% DNA linier/sirkular terbuka. Klien sering kali lebih menyukai ≥95% superkoil. Kadar endotoksin adalah: penelitian (>50 EU/µg), transfeksi (<50 EU/µg), dan bebas endotoksin (<0.1 EU/µg).

DNA Plasmid Superkoil

Plasmid dari Escherichia coli meliputi DNA superkoil (SC), DNA sirkular terbuka (OC), dan DNA linier (L). Proporsi SC yang tinggi meningkatkan efisiensi dan ekspresi transfeksi. Misalnya, transfeksi plasmid SC 85.45% 2.5x lebih tinggi, dan ekspresi HGF plasmid SC 93.28% 1.8x lebih tinggi, yang menegaskan keunggulan DNA SC.

DNA melingkar terbuka: Ketika satu untai DNA untai ganda putus, struktur superkoil menjadi longgar, membentuk plasmid melingkar terbuka dengan volume lebih besar yang bermigrasi paling lambat selama elektroforesis dan diposisikan di bagian atas.

DNA Linear: Ketika kedua untai DNA plasmid putus, terbentuklah struktur linear, dengan volume yang relatif lebih kecil yang bermigrasi lebih cepat daripada DNA melingkar terbuka tetapi lebih lambat daripada DNA superkoil, yang diposisikan kedua.

DNA superkoil: Dua heliks saling terjalin, terpilin menjadi struktur superkoil berdasarkan heliks DNA. DNA ini memiliki volume terkecil dan bermigrasi paling cepat selama elektroforesis, terletak di bagian bawah.

Analisis Kuantitatif Proporsi Superkoil

Laboratorium menggunakan elektroforesis gel agarosa (AGE) dan Gel-Pro Analyzer untuk menilai proporsi superkoil melalui gambar elektroforesis. Satu gambar menunjukkan 97.539% SC DNA, sementara gambar lain menunjukkan 63.833% SC dan 36.167% OC DNA (DNA linier tidak terlihat).

Rahasia Endotoksin dalam Plasmid

Endotoksin merupakan komponen lapisan luar dinding sel bakteri Gram-negatif yang dilepaskan setelah kematian atau lisis bakteri. Endotoksin mengandung lipopolisakarida A yang bersifat toksik. Selama ekstraksi plasmid, endotoksin memasuki larutan lisis, yang memengaruhi efisiensi transfeksi dan memicu respons imun nonspesifik, sehingga menghasilkan hasil positif palsu dalam percobaan.

Analisis Kuantitatif dan Kualitatif Endotoksin

Tes lisat amebosit Limulus (LAL) mendeteksi endotoksin melalui penggumpalan dengan asam 2-keto-3-deoksioktonik (KDO) dalam lipopolisakarida (LPS). Tes ini bersifat kualitatif dan semi-kuantitatif, yang menunjukkan keberadaan endotoksin melalui koagulasi atau perubahan warna saat dicampur dengan sampel.

Yaohai Bio-Pharma menawarkan plasmid superkoil bebas endotoksin. Pengalihdayaan ke Yaohai meningkatkan efisiensi transfeksi dan ekspresi. Plasmid yang dikirim memiliki proporsi SC ≥95% (rata-rata 85%±10%) dan kadar endotoksin ≤0.1, ≤0.01, atau ≤0.005 EU/μg.

Kami juga secara aktif mencari mitra global institusional atau individu. Kami menawarkan kompensasi paling kompetitif di industri. Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami: Alamat: [email protected]