Kontrol Kualitas dan Aplikasi Protein Rekombinan

Kontrol kualitas protein rekombinan sangat penting untuk keandalan dan reproduktifitas data eksperimen. Setiap langkah, dari desain proyek hingga proses produksi, memerlukan strategi kontrol kualitas yang ketat.

Strategi Pengendalian Mutu

Sektor industri mematuhi prosedur operasi standar yang ketat, sementara komunitas akademis perlu meningkatkan pengetahuan profesional untuk meningkatkan reproduktifitas data. Protein dengan aplikasi biologis atau karakteristik biokimia tertentu memerlukan strategi pengendalian mutu (QC) yang disesuaikan.

Contoh dan Solusi yang Menantang

Yaohai Bio-Pharma memiliki pengalaman luas dalam produksi dan pemurnian protein rekombinan, ditambah dengan tim ahli, yang memastikan bahwa produksi protein Anda diselesaikan dengan kemurnian tinggi. Dengan memanfaatkan pengalaman kami dari ratusan proyek, Yaohai dengan baik hati merangkum cara mengoptimalkan pemurnian protein.

Protein Pengikat Asam Nukleat: Langkah-langkah penghilangan asam nukleat, seperti nuklease atau presipitasi PEI, diperlukan. Rasio A260nm/A280nm dipantau untuk mendeteksi kontaminasi asam nukleat.

Rantai Berat Feritin Tikus 1 untuk cryo-EM: Langkah pemurnian perlu dioptimalkan, dan nuklease perlu ditambahkan untuk mengurangi rasio A260nm/A280nm dan memastikan kemurnian protein.

Protein Chimeric Manusia dsRBEC: Lisis sel menggunakan penyangga yang mengandung urea, diikuti dengan pelipatan ulang pada kolom untuk memperoleh protein yang aktif secara fungsional.

Protein yang Mengikat Kation Divalen: Kation divalen spesifik harus ditambahkan selama ekspresi dan pemurnian, dan agen khelasi harus dihindari.

Protein Besi-Sulfur: Imidazol harus dihindari untuk mencegah terganggunya gugus [2Fe ± 2S], memastikan pelipatan dan fungsi protein yang benar.

Fragmen Larut LLT1: Desain mutan mengoptimalkan pembentukan ikatan disulfida dan pelipatan protein, menghasilkan protein yang stabil dan berproduksi tinggi.

Kristalisasi Kinase CLK1: Ko-ekspresi dengan λ-fosfatase menghilangkan fosfat dari lokasi fosforilasi, dan kromatografi pengecualian ukuran (SEC) dan kromatografi pertukaran anion digunakan untuk memperoleh CLK1 homogen tanpa fosforilasi heterogen.

Protein untuk Penggunaan Antigen: Penilaian kemurnian diperlukan untuk menghindari kontaminasi dengan protein yang sangat imunogenik. Untuk antibodi epitop struktural, konformasi tiga dimensi antigen harus dipertahankan.

Protein yang Rentan terhadap Agregasi: Strategi seperti penyaringan berbagai strain dan penurunan suhu budidaya digunakan untuk membatasi masalah agregasi, dan strategi pemurnian cepat dirancang.

Penghapusan Endotoksin: Metode seperti kromatografi muatan positif dan kromatografi afinitas ligan polikation menghilangkan endotoksin, memastikan kadar LPS berada di bawah batas aplikasi.

Kompleks Protein: Subunit diekspresikan secara terpisah dan disusun secara in vitro atau diekspresikan bersama untuk membentuk kompleks fungsional. Integritas kompleks dievaluasi berdasarkan homogenitas dan massa molar.

Kesimpulan

Produksi protein dimulai dengan desain strategis, dengan mempertimbangkan sifat biokimia dan aplikasinya. Selama ekspresi, pemurnian, dan QC, kondisi dan metode dioptimalkan untuk stabilitas, non-agregasi, dan keadaan asli. Protein yang dimurnikan memiliki berbagai kegunaan hilir, seperti karakterisasi biofisik.

Yaohai Bio-Pharma juga secara aktif mencari mitra global baik institusional maupun individu dan menawarkan kompensasi paling kompetitif di industri ini. Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami: [email protected]