Kontrol Kualitas dan Aplikasi Protein Rekombinan

Pengendalian kualitas pada protein rekombinan sangat penting untuk keandalan dan reproduktibilitas data eksperimen. Setiap langkah, dari desain proyek hingga proses produksi, memerlukan strategi pengendalian kualitas yang ketat.

Strategi Pengendalian Kualitas

Sektor industri mematuhi prosedur operasi standar yang ketat, sementara komunitas akademik perlu meningkatkan pengetahuan profesional untuk meningkatkan reproduktibilitas data. Protein dengan aplikasi biologis tertentu atau karakteristik biokimia memerlukan strategi pengendalian kualitas (QC) yang disesuaikan.

Contoh Tantangan dan Solusi

Yaohai Bio-Pharma memiliki pengalaman luas dalam produksi dan pemurnian protein rekombinan, serta didukung oleh tim ahli, memastikan bahwa produksi protein Anda selesai dengan tingkat kemurnian tinggi. Dengan memanfaatkan pengalaman dari ratusan proyek, Yaohai dengan senang hati merangkum cara mengoptimalkan pemurnian protein.

Protein Pengikat Asam Nukleat: Langkah-langkah penghilangan asam nukleat, seperti nuklease atau presipitasi PEI, diperlukan. Rasio A260nm/A280nm dipantau untuk mendeteksi kontaminasi asam nukleat.

Ferritin Berat Tikus Tipe 1 untuk kriyo-EM: Langkah-langkah pemurnian perlu dioptimalkan, dan nuklease perlu ditambahkan untuk menurunkan rasio A260nm/A280nm dan memastikan keaslian protein.

Protein Kimeris Manusia dsRBEC: Lisis sel menggunakan buffer yang mengandung urea, diikuti dengan refolding kolom untuk memperoleh protein yang aktif secara fungsional.

Protein Pengikat Kation Divalen: Kation divalen spesifik harus ditambahkan selama ekspresi dan pemurnian, dan agen kelenjar harus dihindari.

Protein Besi-Sulfur: Imidazole harus dihindari untuk mencegah gangguan kluster [2Fe ± 2S], memastikan pelipatan dan fungsi protein yang benar.

Fragmen Larut dari LLT1: Desain mutan mengoptimalkan pembentukan ikatan disulfida dan pelipatan protein, menghasilkan protein yang stabil dan berkelimpahan tinggi.

Kristalisasi Kinase CLK1: Ko-ekspresi dengan fosfatase λ menghilangkan fosfat dari situs fosforilasi, dan kromatografi eksklusi ukuran (SEC) serta kromatografi pertukaran anion digunakan untuk memperoleh CLK1 homogen tanpa fosforilasi heterogen.

Protein untuk Penggunaan Antigen: Penilaian kekotoran diperlukan untuk menghindari kontaminasi dengan protein yang sangat imunogenik. Untuk antibodi epitop struktural, konformasi tiga dimensi antigen harus dipertahankan.

Protein yang Rentan Menggumpal: Strategi seperti penyaringan strain yang berbeda dan menurunkan suhu budidaya digunakan untuk membatasi masalah penggumpalan, dan strategi pemurnian cepat dirancang.

Penghilangan Endotoksin: Metode seperti kromatografi muatan positif dan afinitas ligand polikation menghilangkan endotoksin, memastikan tingkat LPS di bawah batas aplikasi.

Kompleks Protein: Subunit diekspresikan secara terpisah dan dirakit in vitro atau diekspresikan bersama untuk membentuk kompleks fungsional. Integritas kompleks dievaluasi berdasarkan homogenitas dan massa molar.

Kesimpulan

Produksi protein dimulai dengan desain strategis, mempertimbangkan sifat-sifat biokimia dan aplikasinya. Selama ekspresi, pemurnian, dan pengendalian kualitas, kondisi dan metode dioptimalkan untuk stabilitas, non-agregasi, dan keadaan asli. Protein yang telah dipurifikasi digunakan untuk berbagai tujuan selanjutnya, seperti karakterisasi biofisik.

Yaohai Bio-Pharma juga aktif mencari mitra global, baik lembaga maupun individu, dan menawarkan kompensasi paling kompetitif di industri. Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami: [email protected]