Mengoptimalkan Proses Pemurnian untuk Insulin Manusia Rekombinan

Dalam beberapa tahun terakhir, pertumbuhan pasien diabetes telah mendorong permintaan insulin, tetapi insulin yang terjangkau tersedia dalam jumlah terbatas. Produksi insulin yang efisien dan ekonomis sangat penting. Terutama diproduksi melalui Escherichia coli (E. coli) dan ragi karena pertumbuhan cepat dan biaya rendah, E. coli menghadapi pemrosesan hilir yang kompleks.

Ikhtisar Pemrosesan Hilir:

Mempurifikasi insulin manusia rekombinan dari badan inklusi E. coli melibatkan beberapa langkah, termasuk pemulihan, pencucian, peleburan dan oksidasi, pemotongan, pertukaran buffer, pemurnian kromatografi, pengendapan, renaturasi, pemotongan enzimatik, dan formulasi.

Yaohai Bio-Pharma memiliki pengalaman luas dalam produksi dan pemurnian insulin rekombinan, ditambah dengan tim ahli, memastikan bahwa produksi insulin Anda selesai dengan efisiensi tinggi. Dengan memanfaatkan pengalaman dari ratusan proyek, Yaohai dengan senang hati merangkum cara mengoptimalkan Proses Pemurnian Hilir untuk Insulin Manusia Rekombinan.

Pemulihan dan Pencucian Tubuh Inklusi:

Sel-sel dipecah menggunakan metode mekanis (seperti ultrasonikasi, homogenisasi bertekanan tinggi) atau pengobatan dengan lisozim, diikuti oleh buffer pencucian (mengandung urea, Triton X-100, dll.) untuk menghilangkan kotoran. Selama pencucian, parameter perlu dioptimalkan untuk memastikan kualitas protein sambil mengontrol biaya.

Pelarutan dan Oksidasi Tubuh Inklusi:

Penyimpang dalam konsentrasi tinggi (seperti guanidine hydrochloride dan urea) digunakan untuk melarutkan tubuh inklusi, dengan penambahan dithiothreitol atau β-merkaptanol untuk mencegah pembentukan ikatan disulfida yang salah. pH dan suhu secara signifikan memengaruhi reaksi pelarutan dan oksidasi.

Pemotongan dan Pertukaran Buffer:

Pemutusan sitogen bromida digunakan untuk menghilangkan asam amino inisiasi N-terminal, tetapi hal ini menimbulkan masalah toksisitas dan spesifisitas rendah. Melalui dialisis, ultrafiltrasi, atau kromatografi eksklusi ukuran, pertukaran buffer menghilangkan bahan kimia berbahaya sebelum operasi selanjutnya.

Pengolahan Kromatografi dan Pengendapan:

Beberapa teknik kromatografi digunakan untuk memurnikan insulin, termasuk kromatografi afinitas, kromatografi pertukaran ion, kromatografi fase terbalik, kromatografi interaksi hidrofobik, dan kromatografi eksklusi ukuran. Metode pengendapan, seperti pengendapan pH dan kristalisasi seng, digunakan untuk menghilangkan kontaminan dan mengkonsentrasikan protein.

Renaturasi:

Protein yang terlarut diencerkan dalam buffer renaturasi untuk mempromosikan pembentukan ikatan disulfida yang benar dan lipatan protein. Kromatografi cair pelipatan protein dan dialisis juga merupakan metode yang digunakan untuk renaturasi.

Pemutusan Enzimatik dan Formulasi:

Trypsin dan carboxypeptidase B digunakan untuk memotong C-peptida, membentuk heterodimer insulin aktif. Akhirnya, kristalisasi dan liofilisasi digunakan untuk menghilangkan garam dan buffer sisa, menyiapkan formulasi yang stabil. Aditif spesifik (seperti seng dan protamin) ditambahkan untuk memenuhi kebutuhan klinis yang berbeda.

Kesimpulan:

Pemrosesan hilir insulin dari E. coli adalah kompleks. Fokus di masa depan harus ditempatkan pada pengoptimalan langkah-langkah ini untuk produksi yang efisien dan ekonomis guna memenuhi permintaan dan menurunkan biaya.

Yaohai Bio-Pharma juga aktif mencari mitra global, baik lembaga maupun individu, dan menawarkan kompensasi paling kompetitif di industri. Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami: [email protected]