Mengoptimalkan Proses Pemurnian untuk Insulin Manusia Rekombinan

Dalam beberapa tahun terakhir, pertumbuhan pasien diabetes telah mendorong permintaan insulin, tetapi insulin yang terjangkau jumlahnya terbatas. Produksi insulin yang efisien dan ekonomis sangat penting. E. coli, yang diproduksi terutama melalui Escherichia coli (E. coli) dan ragi karena pertumbuhannya yang cepat dan biaya yang rendah, menghadapi pemrosesan hilir yang rumit.

Tinjauan Umum Pemrosesan Hilir:

Pemurnian insulin manusia rekombinan dari badan inklusi E. coli melibatkan beberapa langkah, termasuk pemulihan, pencucian, pelarutan dan oksidasi, pembelahan, pertukaran buffer, pemurnian kromatografi, presipitasi, renaturasi, pembelahan enzimatik, dan formulasi.

Yaohai Bio-Pharma memiliki pengalaman luas dalam produksi dan pemurnian insulin rekombinan, ditambah dengan tim ahli, yang memastikan bahwa produksi insulin Anda diselesaikan dengan efisiensi tinggi. Dengan memanfaatkan pengalaman kami dari ratusan proyek, Yaohai dengan baik hati merangkum cara mengoptimalkan Proses Pemurnian Hilir untuk Insulin Manusia Rekombinan.

Pemulihan dan Pencucian Tubuh Inklusi:

Sel-sel dihancurkan menggunakan metode mekanis (seperti ultrasonikasi, homogenisasi tekanan tinggi) atau perawatan lisozim, diikuti dengan pencucian dengan buffer (mengandung urea, Triton X-100, dll.) untuk menghilangkan kotoran. Selama pencucian, parameter perlu dioptimalkan untuk memastikan kualitas protein sekaligus mengendalikan biaya.

Badan Inklusi Pelarutan dan Oksidasi:

Denaturan konsentrasi tinggi (seperti guanidin hidroklorida dan urea) digunakan untuk melarutkan badan inklusi, dengan dithiothreitol atau β-merkaptoetanol yang ditambahkan untuk mencegah pembentukan ikatan disulfida yang salah. pH dan suhu berdampak signifikan terhadap reaksi pelarutan dan oksidasi.

Pembelahan dan Pertukaran Buffer:

Pembelahan sianogen bromida digunakan untuk menghilangkan asam amino pemicu N-terminal, tetapi menimbulkan masalah toksisitas dan spesifisitas rendah. Melalui dialisis, ultrafiltrasi, atau kromatografi pengecualian ukuran, pertukaran Buffer menghilangkan reagen berbahaya sebagai persiapan untuk operasi berikutnya.

Pemurnian dan Presipitasi Kromatografi:

Beberapa teknik kromatografi digunakan untuk memurnikan insulin, termasuk kromatografi afinitas, kromatografi pertukaran ion, kromatografi fase terbalik, kromatografi interaksi hidrofobik, dan kromatografi pengecualian ukuran. Metode presipitasi, seperti presipitasi pH dan kristalisasi seng, digunakan untuk menghilangkan kotoran dan mengonsentrasikan protein.

Renaturasi:

Protein yang dilarutkan diencerkan dalam buffer renaturasi untuk meningkatkan pembentukan ikatan disulfida dan pelipatan protein yang benar. Kromatografi cair pelipatan protein dan dialisis juga merupakan metode yang digunakan untuk renaturasi.

Pembelahan dan Formulasi Enzimatik:

Tripsin dan karboksipeptidase B digunakan untuk memecah peptida C, membentuk heterodimer insulin aktif. Terakhir, kristalisasi dan liofilisasi digunakan untuk menghilangkan garam dan penyangga yang tersisa, sehingga menghasilkan formulasi yang stabil. Aditif khusus (seperti seng dan protamin) ditambahkan untuk memenuhi berbagai kebutuhan klinis.

Kesimpulan:

Pengolahan Hilir Insulin dari E. coli rumit. Fokus masa depan harus diarahkan pada pengoptimalan langkah-langkah ini untuk produksi yang efisien dan ekonomis guna memenuhi permintaan dan mengurangi biaya.

Yaohai Bio-Pharma juga secara aktif mencari mitra global baik institusional maupun individu dan menawarkan kompensasi paling kompetitif di industri ini. Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami: [email protected]