Proses Pembuatan mRNA eGFP

Pembuatan mRNA eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) melibatkan serangkaian teknik biologi molekuler untuk menghasilkan molekul RNA fungsional yang mengkodekan untuk ekspresi eGFP. Dalam bidang mRNA eGFP, Yaohai Bio-Pharma telah menumpuk pengalaman luas dalam memenuhi kebutuhan spesifik klien. Dengan memanfaatkan pengalaman kami, kami telah menyusun alur proses untuk menghasilkan mRNA EGFP.

1. Kloning Gen eGFP : Untuk mendapatkan urutan gen yang mengkodekan untuk eGFP. Gen ini biasanya dikloning dari vektor plasmid yang sudah ada atau sintesis secara buatan berdasarkan urutan nukleotida yang dikenal. Gen yang dikloning kemudian diverifikasi melalui pembarutan untuk memastikan akurasi.
2. Optimasi Gen untuk Ekspresi : Untuk ekspresi optimal dalam sistem target (misalnya, sel mamalia, bakteri, atau sistem transkripsi in vitro), gen eGFP dapat mengalami optimasi kodon. Ini melibatkan penggantian kodon langka dalam urutan asli dengan yang lebih sering digunakan dalam organisme tuan, meningkatkan peluang translasi yang efisien.
3. In vitro Persiapan Templat Transkripsi : Setelah gen yang dioptimalkan siap, ia dimasukkan ke dalam vektor yang sesuai, sering kali plasmid, yang berisi elemen regulasi yang diperlukan untuk transkripsi (misalnya, urutan promotor). Plasmid ini berfungsi sebagai templat untuk transkripsi in vitro.
4. In vitro Transkripsi : Dengan menggunakan plasmid template yang telah disiapkan, transkripsi in vitro dilakukan untuk mensintesis mRNA eGFP. Proses ini melibatkan penggunaan enzim polimerase RNA, yang mengenali urutan promotor dan memulai transkripsi, menghasilkan helai RNA yang komplementer terhadap template DNA. Bergantung pada aplikasi yang diinginkan, mRNA dapat diberi kap, poliadenilasi, dan/atau dimodifikasi untuk meningkatkan stabilitas dan efisiensi translasi.
5. Pemurnian dan Pengendalian Kualitas : mRNA eGFP yang disintesis kemudian dipisahkan untuk menghilangkan kontaminan apa pun, termasuk DNA, protein, dan nukleotida bebas. Metode pemurnian dapat mencakup elektroforesis gel, kromatografi kolom, atau pemisahan berbasis bead. Setelah pemurnian, mRNA dianalisis untuk kualitasnya, termasuk konsentrasi, kebersihan, dan integritas, menggunakan teknik seperti spektrofotometri UV-Vis dan elektroforesis gel.
6. Penyimpanan dan Pengiriman : mRNA eGFP yang telah dipurifikasi biasanya disimpan pada suhu rendah untuk menjaga stabilitasnya. Untuk penggunaan eksperimen, mRNA dapat dikeluarkan ke dalam sel menggunakan berbagai metode, termasuk elektroporasi, lipofeksi, atau vektor viral, tergantung pada aplikasi dan jenis sel target tertentu.
7. Ekspresi dan Verifikasi : Setelah masuk ke dalam sel, mRNA eGFP ditranslasikan menjadi protein fluoresen hijau ditingkatkan, yang dapat diamati menggunakan mikroskop fluoresensi. Hal ini memungkinkan verifikasi produksi mRNA yang berhasil, pengiriman, dan ekspresi.

Secara keseluruhan, produksi mRNA eGFP melibatkan kloning gen, mengoptimalkannya untuk ekspresi, menyiapkan templat transkripsi in vitro, melakukan reaksi transkripsi, memurnikan mRNA hasil, dan akhirnya mengirimkannya ke dalam sel untuk ekspresi dan verifikasi.

Kami juga secara aktif mencari mitra global, baik lembaga maupun individu. Kami menawarkan kompensasi paling kompetitif di industri. Jika Anda memiliki pertanyaan, silakan hubungi kami: [email protected]