Интегритет на mRNA
Значењето на анализата на интегритет на mRNA
mRNA се препознаваат по нивната вродена нестабилност и се подложни на фрагментација во присуство на надворешни фактори, особено за време на ин витро транскрипција (IVT) и процеси на прочистување, каде што сеприсутните нуклеази претставуваат предизвик. Оценувањето на интегритетот на mRNA е од клучно значење во последователниот развој на лекови базирани на mRNA, обезбедувајќи и безбедност и достапност на производот.
Yaohai-BioPharma обезбедува сеопфатни услуги за тестирање на интегритетот на mRNA, користејќи методи како што се електрофореза со гел агароза (AGE), капиларна електрофореза (CEG) и течна хроматографија со високи перформанси (HPLC), придржувајќи се до ригорозни стандарди за квалитет и за истражување и за клинички испитувања.
Регулаторни барања за интегритет на mRNA
Според регулаторните размислувања на СЗО, „интегритетот на структурата на mRNA се смета за критичен квалитет за ослободување на mRNA. Така, потребна е контрола за интегритетот на mRNA, процентот на недопрена mRNA, процентуалните фрагменти на mRNA и така натаму.
Аналитички метод
Анализа |
Методи |
интегритет на mRNA |
AГЕ, агарозаgел електрофореза |
CGE,Капиларна електрофореза |
CGE-LIF, Електрофореза на капиларен гел со детекција на флуоресценција индуцирана од светлина |
Интегритет на мРНК со електрофореза со гел агароза
Електрофорезата со гел агароза е широко употребувана техника за евалуација на интегритетот на вкупната РНК. Ова вклучува пуштање на примерокот на РНК на денатуриран гел од агароза, обоен или со етидиум бромид или со SYBR Green. Денатурирачкиот гел, составен од агароза, го олеснува одвојувањето на РНК врз основа на големината кога се применува електрична струја. Како што негативно наелектризираната РНК мигрира кон позитивниот крај на гелот, помалите фрагменти се движат побрзо, што резултира со сортирање на молекулите на РНК според големината.
Интегритет на мРНК со електрофореза на капиларен гел
Електрофорезата на капиларниот гел (CGE) е аналитички пристап со висока резолуција, клучен за мерење на интегритетот на молекулите на РНК по должина. Оваа проценка има значење за обезбедување квалитет, разбирање на моќта и оптимизација на производните процеси. Слично на електрофорезата со гел од агароза, CGE користи електрична струја за да ги издвои фрагментите на РНК врз основа на нивниот полнеж и големина. Во CGE, капиларот се полни со матрица за сепарационен гел внесена со флуоресцентна боја. Движењето на РНК по должината на капиларите зависи од нејзината големина, а откривањето се постигнува со помош на детектори за флуоресцентни ултравиолетови (УВ) или светло-индуцирани (LIF).
EN
