Memperjuangkan Metode Modifikasi RNA Reporter

Saat memilih metode modifikasi mRNA reporter mana yang lebih baik, tidak ada jawaban pasti karena setiap metode dan gen reporter memiliki kelebihan dan skenario yang dapat diterapkan. Berikut ini adalah beberapa metode modifikasi mRNA dan gen reporter yang umum, beserta karakteristik dan kesesuaiannya.

Metode Modifikasi mRNA

Metilasi:

1. m6a: Terkait dengan stabilitas mRNA, penyambungan, penerjemahan, dan pemrosesan miRNA. Tantangan deteksi meliputi pemilihan dan pelokalan antibodi.
2. 5' Tutup Nm: Meningkatkan stabilitas, penyambungan, poliadenilasi, dan ekspor inti. Membantu membedakan RNA sendiri dari RNA asing.
3. Pseudouridilasi: Mengubah kodon, meningkatkan stabilitas, dan merespons stres. Dikatalisis oleh pseudouridin sintase.

Pengenalan Nukleotida Non-Alami:

1. Diperkenalkan selama transkripsi dengan strategi modifikasi kimia ganda. Meningkatkan stabilitas, efisiensi, dan ekspresi protein.

Gen Reporter

1. Gen Protein Fluoresens Hijau (GFP): Kelebihan: Mudah dideteksi, sifat fluoresensi stabil, tidak beracun bagi sel, cocok untuk pencitraan sel hidup. Kekurangan: Intensitas fluoresensi terbatas.
2. Protein Fluoresensi Hijau yang Ditingkatkan (eGFP): Keunggulan: Lebih dari 6 kali lebih terang daripada GFP tipe liar, membuatnya lebih cocok sebagai gen reporter untuk mempelajari ekspresi gen, regulasi, diferensiasi sel, serta lokalisasi dan transportasi protein dalam organisme.
3. Protein Fluoresensi Merah (misalnya, mCherry): Keunggulan: Panjang gelombang eksitasi dan emisi yang lebih panjang, menghasilkan latar belakang yang lebih rendah selama pencitraan intraseluler, kecerahan fluoresensi dan fotostabilitas yang sangat baik, dan toksisitas seluler yang lebih rendah. Kekurangan: Mungkin tidak umum digunakan seperti GFP dalam kondisi eksperimen tertentu.
4. Luciferase Kunang-kunang: Keunggulan: Dengan adanya ATP, ion magnesium, dan oksigen, ia dapat mengkatalisis oksidasi luciferin menjadi oxyluciferin, yang memancarkan bioluminesensi. Ia cocok digunakan sebagai kontrol untuk mempelajari efisiensi translasi gen target dalam sel mamalia, viabilitas sel, dan uji pencitraan in vivo.

Kesimpulan

Saat memilih metode modifikasi mRNA reporter mana yang lebih disukai, hal itu bergantung pada tujuan eksperimen tertentu, latar belakang penelitian, dan kondisi eksperimen. Misalnya, jika sensitivitas tinggi diperlukan, eGFP mungkin merupakan pilihan yang lebih baik. Jika pencitraan pada panjang gelombang yang lebih panjang diperlukan untuk mengurangi interferensi latar belakang, protein fluoresensi merah seperti mCherry mungkin lebih cocok. Selain itu, berdasarkan kebutuhan modifikasi mRNA tertentu (misalnya, meningkatkan stabilitas, meningkatkan efisiensi translasi), metode modifikasi yang sesuai dapat dipilih.

Sebagai CRDMO biologika mikroba pertama dan terbesar di Tiongkok Raya, Yaohai Bio-Pharma menawarkan solusi khusus terpadu dan menyeluruh atau layanan mandiri mulai dari sintesis RNA, rekayasa dan konstruksi strain, pengembangan proses hulu dan hilir, hingga manufaktur zat obat tingkat GMP atau non-GMP, dan layanan pengisian & penyelesaian untuk berbagai modalitas, seperti mRNA, circRNA, plasmid RNA, protein rekombinan, peptida, enzim, antibodi domain tunggal, dan VLP untuk penggunaan manusia dan hewan.

Yaohai Bio-Pharma juga secara aktif mencari mitra global baik institusional maupun individu dan menawarkan kompensasi paling kompetitif di industri ini. Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami: Alamat: [email protected]