Mendukung Metode Modifikasi RNA Reporter

Ketika memilih metode modifikasi mRNA reporter yang lebih disukai, tidak ada jawaban pasti karena setiap metode dan gen reporter memiliki keunggulan masing-masing dan skenario penerapan. Berikut adalah beberapa metode modifikasi mRNA dan gen reporter yang umum, beserta karakteristik dan kesesuaiannya.

metode Modifikasi mRNA

Metilasi:

1. m6A : Terkait dengan stabilitas mRNA, splicing, translasi, dan pemrosesan miRNA. Tantangan deteksi meliputi pemilihan antibodi dan lokalisasi.
2. 5' Cap Nm : Meningkatkan stabilitas, splicing, poliadenilasi, dan ekspor nuklir. Membantu membedakan self-RNA dari RNA asing.
3. Pseudouridilasi : Mengubah kodon, meningkatkan stabilitas, dan merespons stres. Dikatalisis oleh sintase pseudouridin.

Pengenalan Nukleotida Non-Alami:

1. Diperkenalkan selama transkripsi dengan strategi modifikasi kimia ganda. Ini meningkatkan stabilitas, efisiensi, dan ekspresi protein.

Gen Reporter

1. Gen Protein Fluoresen Hijau (GFP) : Keuntungan: Mudah dideteksi, sifat fluoresen stabil, tidak beracun bagi sel, cocok untuk pencitraan sel hidup. Kerugian: Intensitas fluoresen terbatas.
2. Protein Fluoresen Hijau Terkuat (eGFP) : Keuntungan: Lebih terang hingga lebih dari 6 kali dibanding GFP tipe liar, membuatnya lebih cocok sebagai gen reporter untuk mempelajari ekspresi gen, regulasi, diferensiasi sel, dan lokalisasi serta transportasi protein dalam organisme.
3. Protein Fluoresen Merah (misalnya, mCherry) : Keuntungan: Panjang gelombang eksitasi dan emisi yang lebih panjang, menghasilkan latar belakang yang lebih rendah selama pencitraan intraseluler, kecerahan fluoresen yang sangat baik dan fotostabilitas, serta toksisitas seluler yang lebih rendah. Kerugian: Mungkin tidak sepopuler GFP dalam kondisi eksperimen tertentu.
4. Luciferase Kepiting Api : Keuntungan: Dalam kehadiran ATP, ion magnesium, dan oksigen, enzim ini dapat memediasi oksidasi luciferin menjadi oksiluciferin, mengeluarkan bioluminesensi. Cocok digunakan sebagai kontrol untuk mempelajari efisiensi translasi gen target pada sel mamalia, viabilitas sel, dan asay pencitraan in vivo.

Kesimpulan

Ketika memilih metode modifikasi mRNA reporter yang lebih disukai, hal ini bergantung pada tujuan eksperimental tertentu, latar belakang penelitian, dan kondisi eksperimen. Misalnya, jika diperlukan sensitivitas tinggi, eGFP mungkin merupakan pilihan yang lebih baik. Jika pencitraan pada panjang gelombang yang lebih panjang diperlukan untuk mengurangi gangguan latar belakang, protein fluoresen merah seperti mCherry mungkin lebih cocok. Selain itu, berdasarkan kebutuhan modifikasi spesifik mRNA (misalnya, meningkatkan stabilitas, meningkatkan efisiensi translasi), metode modifikasi yang sesuai dapat dipilih.

Sebagai yang pertama dan terbesar CRDMO biologis mikroba di Tiongkok Besar, Yaohai Bio-Pharma menawarkan solusi khusus end-to-end satu atap atau layanan mandiri mulai dari sintesis RNA, rekayasa dan konstruksi strain, pengembangan proses hulu dan hilir, hingga produksi bahan obat sesuai tingkat GMP atau non-GMP, serta layanan pengisian & penyelesaian untuk berbagai modalitas, seperti mRNA, circRNA, plasmid RNA, protein rekombinan, peptida, enzim, antibodi domain tunggal, dan VLP untuk penggunaan manusia dan veteriner.

Yaohai Bio-Pharma juga aktif mencari mitra global, baik lembaga maupun individu, dan menawarkan kompensasi paling kompetitif di industri. Jika Anda memiliki pertanyaan, jangan ragu untuk menghubungi kami: [email protected]