mRNA 5'ক্যাপিং দক্ষতা
mRNA 5'ক্যাপিং দক্ষতা বিশ্লেষণের তাৎপর্য
mRNA-এর 5′ প্রান্তে অবস্থিত ক্যাপ কাঠামোটি ইউক্যারিওটের মধ্যে mRNA-এর দক্ষ অনুবাদ, স্থিতিশীলকরণ এবং পরিবহনে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। ইন ভিট্রো-ট্রান্সক্রাইবড (আইভিটি) এমআরএনএর প্রেক্ষাপটে, 5' ক্যাপ কো-ট্রান্সক্রিপশনাল ক্যাপিং বা এনজাইমেটিক ক্যাপিং প্রক্রিয়ার মাধ্যমে প্রবর্তিত হয়। IVT RNAs-এর একটি অপরিহার্য উপাদান হিসাবে, 5′ ক্যাপ একটি গুরুত্বপূর্ণ গুণমান বৈশিষ্ট্য (CQA) হিসাবে দাঁড়িয়েছে যা প্রক্রিয়া বিকাশ এবং ব্যাচ প্রকাশের সময় ব্যাপক বৈশিষ্ট্যের প্রয়োজন।
ইয়াওহাই-বায়ো ফার্মা ব্যাপক 5' ক্যাপিং দক্ষতা বিশ্লেষণ সমাধান প্রদান করে, অলিগোনিউক্লিওটাইড স্প্লিন্টস (প্রোব) ডিজাইন, RNase H ক্লিভেজ, আইপি-আরপি- আয়ন-পেয়ার রিভার্সড-ফেজ হাই-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (আইপি-আরপি-এইচপিএলসিডি) ভর স্পেকট্রোমেট্রি (এলসি-এমএস), ডেটা বিশ্লেষণ।
mRNA অখণ্ডতার জন্য নিয়ন্ত্রক প্রয়োজনীয়তা
WHO এর নিয়ন্ত্রক বিবেচনা অনুযায়ী, "mRNA এর কাঠামোর অখণ্ডতাকে mRNA প্রকাশের জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ মানের বৈশিষ্ট্য হিসাবে বিবেচনা করা হয়। সুতরাং, mRNA অখণ্ডতা, 5′ ক্যাপিং দক্ষতা, 3′ পলি(A) লেজের উপস্থিতি বা দৈর্ঘ্য ইত্যাদির জন্য নিয়ন্ত্রণ প্রয়োজন।"
বিশ্লেষণী পদ্ধতি
বিশ্লেষণ | পদ্ধতি |
mRNA 5'ক্যাপিং দক্ষতা | Lহজমের পর সি-এমএস |
কার্যপ্রণালী
ধাপ 1. অলিগোনিউক্লিওটাইড স্প্লিন্ট (প্রোব) ডিজাইন
2'-ও-মিথাইলনিউক্লিওটাইডস এবং টেট্রাডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিওটাইডসকে অন্তর্ভুক্ত করে ক্লিভেজ প্রোব, যখন RNase H উপস্থিত থাকে তখন নির্দিষ্ট অবস্থানে একটি পরিপূরক RNA স্ট্র্যান্ড ক্লিভ করে। এই পদ্ধতিটি বৃহত্তর আরএনএ খণ্ডের লক্ষ্যবস্তু প্রজন্মের জন্য অত্যন্ত মূল্যবান প্রমাণ করে।
ধাপ 2. RNase H ক্লিভেজ
একটি বায়োটিনিলেটেড প্রোব, কৌশলগতভাবে mRNA-এর 5' প্রান্তের পরিপূরক হিসাবে ডিজাইন করা হয়েছে, RNase H-এর সাথে একত্রে প্রয়োগ করা হয় 5' প্রান্তের অলিগোনিউক্লিওটাইডের লক্ষ্যযুক্ত ক্লিভেজকে অনুঘটক করার জন্য।
ধাপ 3. IP-RP-HPLC/LC-MS
অলিগোনিউক্লিওটাইড এলসি-এমএস বিশ্লেষণে, পছন্দের ক্রোমাটোগ্রাফিক মোড হল আয়ন-পেয়ারিং রিভার্সড-ফেজ (আইপি-আরপি) বিচ্ছেদ অ্যামাইন মোবাইল ফেজ অ্যাডিটিভ ব্যবহার করে। এটি তাদের উচ্চতর সমাধান করার ক্ষমতা এবং ভর স্পেকট্রোমেট্রি (এমএস) এর সাথে সামঞ্জস্যের জন্য দায়ী করা হয়।
ধাপ4. তথ্য বিশ্লেষণ
ডিফসফেট, ট্রাইফসফেট বা আনমেথাইলেড জি ক্যাপ (GpppG) এর বিপরীতে m7GpppG ক্যাপ সমন্বিত ক্লিভেজ টুকরোগুলিতে পরিলক্ষিত স্বতন্ত্র ভরগুলি তাদের সনাক্তকরণের সুবিধা দেয় এবং ক্যাপিং দক্ষতার অনুমান সক্ষম করে।
LC-MS এর সাথে ক্যাপিং দক্ষতা বিশ্লেষণের ক্ষেত্রে
ইয়াওহাই-বায়ো ফার্মা অলিগোনিউক্লিওটাইড স্প্লিন্ট (প্রোব) ডিজাইন, RNase H ক্লিভেজ, IP-RP-HPLC/LC-MS থেকে ডেটা বিশ্লেষণ পর্যন্ত mRNA ক্যাপিং দক্ষতা বিশ্লেষণের জন্য শক্তিশালী পদ্ধতি তৈরি করেছে।
মোট আয়ন ক্রোমাটোগ্রাম (বাম) এবং ইলেক্ট্রোস্প্রে ভর স্পেকট্রা (ডান) 5'এন্ড ক্লিভেজ টুকরা
EN
