E. coli šūnu integritātes optimizēšana Biopharma ražošanai

Biofarmaceitikas jomā Escherichia coli (E. coli) ir svarīga loma kā saimnieks rekombinanto proteīnu ekspresijā. E. coli šūnu integritātei ir izšķiroša nozīme olbaltumvielu iznākumā, kvalitātē un ražošanas izmaksās. Šī integritāte galvenokārt ietver iekšējās membrānas (IM) un ārējās membrānas (OM) struktūru un funkcijas.

Yaohai Bio-Pharma ir 15 gadus ilga E. coli fermentācija un rekombinantā proteīna ekspresija. Mēs izmantojam dažādas stratēģijas, lai saglabātu augstu E. coli šūnu integritāti, plazmīdu iznākums pārsniedz 1g/l 30 stundu kultivēšanas ciklā. Balstoties uz plašo pieredzi mikrobu ekspresijas jomā, Yaohai Bio-Pharma ir apkopojis vairākas efektīvas stratēģijas, lai uzraudzītu un uzlabotu E. coli šūnu integritāti biofarmaceitiskās ražošanas laikā.

E. coli šūnu integritātes uzraudzības metodes

Plūsmas citometrija: izmanto fluorescējošas krāsvielas, lai diferencētu šūnu stāvokļus, piemēram, propīdija jodīds šūnu dzīvotspējas noteikšanai un SYTO9, lai novērtētu OM caurlaidību. Tomēr tas prasa augstās traipu izmaksas un sarežģītas darbības.

Kolorimetriskās metodes: atspoguļojiet šūnu līzi, nosakot DNS saturu, enzīmu aktivitātes utt., supernatantā, piemēram, izmantojot PicoGreen reaģentu komplektu un sārmainās fosfatāzes aktivitātes testus. Tomēr šīs metodes ir apgrūtinošas un prasa dārgus reaģentus.

Augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfija: izmanto ārpusšūnu produktu koncentrācijas noteikšanai bezsaistē, lai novērtētu OM noplūdi. Tomēr tā automatizācija ir sarežģīta un analīzes laiks ir ilgs.

Vibrācijas spektroskopijas metodes: piemēram, infrasarkanā un vidējā infrasarkanā spektroskopija, kam ir potenciāls pielietojums, taču ir jāpārvar spektrālo traucējumu un datu analīzes problēmas.

Dielektriskā spektroskopija: novērtē membrānas integritāti, mērot šūnu suspensiju pretestību, nodrošinot reāllaika tiešsaistes uzraudzību. Tomēr tas ir jutīgs pret traucējumiem, un kalibrēšana ir sarežģīta.

Biosensori: var noteikt savienojumus, kas noplūduši no šūnām vai periplazmas, taču saskaras ar tādām problēmām kā sensora reģenerācijas grūtības.

Viskozitātes un blīvuma mērījumi: zemas izmaksas un ātra analīze, taču trūkst selektivitātes, un spriedumam ir jāņem vērā vairāku partiju dati.

Faktori, kas ietekmē šūnu integritāti

Celma inženierija: maina OM integritāti, izmantojot gēnu inženieriju, piemēram, mutējot lipoproteīnu gēnus, bet var ietekmēt celma augšanu.

Inducēts stress: Rekombinanto proteīnu pārmērīga ekspresija izraisa vielmaiņas slogu, ietekmējot šūnu fizioloģiju. Tāpēc ir nepieciešams saprātīgs izteiksmes līmeņu regulējums.

Substrāta barošanas ātrums: gan pārmērīgi augsts, gan zems barošanas ātrums ietekmē šūnu līzi un OM integritāti.

Temperatūra un aerācija: augsta temperatūra un zema skābekļa pieejamība palielina izteiksmes stresu un attiecīgi OM noplūdi, taču specifiskā ietekme atšķiras.

Osmotiskie līdzekļi: izmanto, lai atbrīvotu periplazmas proteīnus, bet bojātu šūnu dzīvotspēju, ierobežojot to pielietojumu.

Secinājums Turpmākajos pētījumos ir jāiedziļinās membrānas remonta mehānismos un apstākļos, lai precīzi kontrolētu šūnu membrānas integritāti. Paredzams, ka uzraudzības metožu optimizēšana un ietekmējošo faktoru analīze uzlabos produktu kvalitāti, tādējādi veicinot biofarmācijas nozares attīstību.

Mēs arī aktīvi meklējam institucionālus vai individuālus globālus partnerus. Mēs piedāvājam konkurētspējīgāko atalgojumu nozarē. Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, sazinieties ar mums pa e-pastu [email protected]