Цэласнасць мРНК
Значэнне аналізу цэласнасці мРНК
МРНК вядомыя сваёй уласцівай нестабільнасцю і адчувальнымі да фрагментацыі ў прысутнасці знешніх фактараў, асабліва падчас транскрыпцыі in vitro (IVT) і працэсаў ачысткі, дзе ўсюдыісныя нуклеазы ствараюць праблему. Ацэнка цэласнасці мРНК мае вырашальнае значэнне ў наступнай распрацоўцы лекаў на аснове мРНК, забяспечваючы як бяспеку, так і даступнасць прадукту.
Yaohai-BioPharma прадастаўляе комплексныя паслугі па тэсціраванні цэласнасці мРНК з выкарыстаннем такіх метадаў, як электрафарэз у агарозным гелі (AGE), капілярны электрафарэз (CEG) і высокаэфектыўная вадкасная храматаграфія (HPLC), прытрымліваючыся строгіх стандартаў якасці як для даследаванняў, так і для клінічных выпрабаванняў.
Нарматыўныя патрабаванні да цэласнасці мРНК
Згодна з нарматыўнымі меркаваннямі СААЗ, «цэласнасць структуры мРНК лічыцца найважнейшым атрыбутам якасці для вызвалення мРНК. Такім чынам, неабходны кантроль за цэласнасцю мРНК, адсоткам непашкоджанай мРНК, адсоткам фрагментаў мРНК і гэтак далей».
Аналітычны метад
Аналіз |
Методыка |
цэласнасць мРНК |
AGE, Агарозаgэлектрафарэз |
CGE,Капілярны электрафарэз |
CGE-LIF, электрафарэз у капілярным гелі з выяўленнем індукаванай святлом флуарэсцэнцыі |
Цэласнасць мРНК з дапамогай электрафарэзу ў агарозным гелі
Электрафарэз у агарозным гелі - шырока выкарыстоўваная методыка для ацэнкі цэласнасці агульнай РНК. Гэта прадугледжвае апрацоўку ўзору РНК на дэнатуруючым агарозным гелі, афарбаваным брамістым этидием або SYBR Green. Дэнатурацыйны гель, які складаецца з агарозы, палягчае аддзяленне РНК у залежнасці ад памеру пры ўжыванні электрычнага току. Калі адмоўна зараджаная РНК мігруе да станоўчага канца геля, больш дробныя фрагменты рухаюцца хутчэй, што прыводзіць да сартавання малекул РНК па памеры.
Цэласнасць мРНК з дапамогай электрафарэзу ў капілярным гелі
Капілярны гель-электрафарэз (CGE) з'яўляецца аналітычным метадам з высокім разрозненнем, ключавым для вымярэння цэласнасці малекул РНК па даўжыні. Гэтая ацэнка мае важнае значэнне для забеспячэння якасці, разумення патэнцыі і аптымізацыі вытворчых працэсаў. Падобна электрафарэзу ў агарозным гелі, CGE выкарыстоўвае электрычны ток для падзелу фрагментаў РНК у залежнасці ад іх зарада і памеру. У CGE капіляр запоўнены раздзяляльнай гелевай матрыцай, прасякнутай флуоресцентным фарбавальнікам. Рух РНК уздоўж капіляра залежыць ад яго памеру, і выяўленне дасягаецца з дапамогай ультрафіялетавых (УФ) або індукаваных святлом флуарэсцэнтных (LIF) дэтэктараў.
EN
