Ліпідны склад LNP. Вызначэнне і колькасць
Значэнне аналізу ліпіднага складу ЛНП
Ліпідныя наначасціцы (LNP), якія ўключаюць катыённыя ліпіды, халестэрын, фасфаліпіды і ПЭГ-кан'югаваныя ліпіды, служаць вядомымі сістэмамі дастаўкі лекавых прадуктаў мРНК. Стабільнасць і двухслойная цякучасць LNP залежаць ад уласцівасцей і зместу розных ліпідаў, якія выкарыстоўваюцца ў сістэме рэцэптуры. Склад ліпідаў вельмі важны для таго, наколькі добра LNP дастаўляюць лекі.
Yaohai-BioPharma прапануе рашэнні для ідэнтыфікацыі і колькаснай ацэнкі ліпіднага складу мРНК-LNP з выкарыстаннем метаду высокаэфектыўнай вадкаснай храматаграфіі з выяўленнем зараджанага аэразоля (HPLC-CAD).
Нарматыўныя патрабаванні да складу ліпідаў
Згодна з нарматыўнымі меркаваннямі СААЗ, «канчатковы склад вакцыны, уключаючы ліпіды, павінен быць апісаны разам з колькасцю кампанентаў у кожнай прэзентацыі».
Аналітычны метад
Аналіз | Методыка |
Ліпідны склад | ВЭЖХ у спалучэнні з дэтэктарам зараджанага аэразолю Corona (CAD) |
Працэдура
Крок 1. Падрыхтоўка пробы ліпідаў
Выбар разбаўляльніка мае першараднае значэнне для аналізу ліпідных кампанентаў у лекавых прадуктах мРНК-LNP. Растваральнік павінен эфектыўна раствараць кожны ліпідны кампанент і парушаць любое ўзаемадзеянне паміж ліпідамі і інкапсуляванай мРНК. Патэнцыйныя разбаўляльнікі ўключаюць этанол, этанол/дыметилсульфоксид (ДМСО), этанол/фармамід, этанол/трыэтыламінацэтат і іншыя.
Крок 2. HPLC-CAD
Вадкасная храматаграфія са зваротнай фазай (RP-HPLC) у спалучэнні з дэтэктарам зараджанага аэразоля (CAD) была ўключана ў тэставанне ліпіднага складу LNP. Улічваючы, што ліпіды не маюць храмафораў і не паглынаюць ультрафіялетавае (УФ) выпраменьванне без дэрыватызацыі, выпарванне звычайна з'яўляецца складанай задачай. CAD, будучы больш адчувальнай, можа распазнаць больш шырокі спектр утрымання ліпідаў. Раней метад вадкаснай храматаграфіі звышвысокай прадукцыйнасці (UHPLC) у спалучэнні з метадам дэтэктара зараджанага аэразоля (CAD) быў распрацаваны і выкарыстоўваўся ў аналізе ліпідаў для даследаванняў малых інтэрферуючых РНК (siRNA) LNP.
Крок 3. Аналіз дадзеных
Колькасць кожнага ліпіда ва ўзоры разлічваецца на аснове стандартнай крывой, памножанай на каэфіцыент развядзення. Гэты працэс дае ўтрыманне ліпідаў для кожнага кампанента ва ўзоры мРНК-LNP.
Выпадак аналізу ліпіднага складу LNP з ВЭЖХ-САПР
На аснове HPLC-CAD Yaohai-BioPharma распрацавала надзейны метад аналізу ліпідных кампанентаў мРНК-LNP. Гэты метад быў пацверджаны як лінейны, паўтаральны, дакладны, дакладны і спецыфічны для складаў LNP, які можа падтрымліваць распрацоўку працэсу, распрацоўку рэцэптуры, тэставанне стабільнасці і вызваленне мРНК-LNP.
Храматаграфічны профіль 4 ліпідаў метадам Yaohai-BioPharma HPLC-CAD
Лінейнасць метаду HPLC-CAD Yaohai-BioPharma (R2>0.99)
EN
