mRNA integriteit
Die belangrikheid van mRNA-integriteitsanalise
mRNA's word erken vir hul inherente onstabiliteit en is vatbaar vir fragmentasie in die teenwoordigheid van eksterne faktore, veral tydens in vitro transkripsie (IVT) en suiweringsprosesse, waar alomteenwoordige nukleases 'n uitdaging inhou. Die evaluering van mRNA-integriteit is van kardinale belang in die daaropvolgende ontwikkeling van mRNA-gebaseerde middels, wat beide veiligheid en produkbeskikbaarheid verseker.
Yaohai-BioPharma verskaf omvattende mRNA-integriteitstoetsdienste, met behulp van metodes soos agarosegelelektroforese (AGE), kapillêre elektroforese (CEG) en hoëprestasie vloeistofchromatografie (HPLC), wat voldoen aan streng kwaliteitstandaarde vir beide navorsing en kliniese proewe.
Regulatoriese vereistes vir mRNA-integriteit
Volgens die WGO se regulatoriese oorwegings, "word die integriteit van die struktuur van die mRNA beskou as 'n kritieke kwaliteit eienskap vir die vrystelling van die mRNA. Beheer is dus nodig vir mRNA-integriteit, persentasie ongeskonde mRNA, persentasie mRNA-fragmente ensovoorts.”
Analitiese metode
Analise |
Metodes |
mRNA integriteit |
AGE, Agarosegel elektroforese |
CGE,Kapillêre elektroforese |
CGE-LIF, Kapillêre gelelektroforese met liggeïnduseerde fluoressensie-opsporing |
mRNA Integriteit deur Agarose Gel Elektroforese
Agarosegelelektroforese is 'n wyd gebruikte tegniek om die integriteit van totale RNA te evalueer. Dit behels die loop van die RNA-monster op 'n denaturerende agarosegel, gekleur met óf etidiumbromied óf SYBR Green. Die denaturerende gel, saamgestel uit agarose, fasiliteer die skeiding van RNA gebaseer op grootte wanneer 'n elektriese stroom toegedien word. Soos die negatief gelaaide RNA migreer na die positiewe einde van die jel, beweeg kleiner fragmente vinniger, wat lei tot 'n grootte-gebaseerde sortering van RNA-molekules.
mRNA-integriteit deur kapillêre gel-elektroforese
Kapillêre gelelektroforese (CGE) staan as 'n hoë-resolusie analitiese benadering deurslaggewend om die integriteit van RNA-molekules volgens lengte te meet. Hierdie assessering hou betekenis in vir gehalteversekering, sterktebegrip en optimalisering van vervaardigingsprosesse. Soortgelyk aan agarosegelelektroforese, gebruik CGE 'n elektriese stroom om RNA-fragmente te skei op grond van hul lading en grootte. In CGE word 'n kapillêre gevul met 'n skeidingsgelmatriks wat met 'n fluoresserende kleurstof toegedien is. Die beweging van RNA langs die kapillêre is afhanklik van die grootte daarvan, en opsporing word bereik met behulp van ultraviolet (UV) of liggeïnduseerde fluoressensie (LIF) detektors.
EN
