Процес производње еГФП мРНА Србија

Производња еГФП (Енханцед Греен Флуоресцент Протеин) мРНК укључује низ техника молекуларне биологије за генерисање функционалног молекула РНК који кодира за експресију еГФП. У области еГФП мРНА, Иаохаи Био-Пхарма је акумулирала велико искуство у задовољавању специфичних потреба клијената. Користећи наше искуство, синтетизовали смо ток процеса за производњу ЕГФП мРНА.

1. Клонирање еГФП гена: За добијање секвенце гена која кодира за еГФП. Овај ген се типично клонира из већ постојећег плазмидног вектора или се вештачки синтетише на основу познате нуклеотидне секвенце. Клонирани ген се затим верификује секвенцирањем како би се осигурала тачност.
2. Оптимизација гена за експресију: За оптималну експресију у циљном систему (нпр. ћелије сисара, бактерије или ин витро системи транскрипције), еГФП ген може бити подвргнут оптимизацији кодона. Ово укључује замену ретких кодона у оригиналној секвенци са чешће коришћеним у организму домаћина, повећавајући шансе за ефикасан превод.
3. Ин витро Припрема шаблона за транскрипцију: Када је оптимизовани ген спреман, он се уграђује у одговарајући вектор, често у плазмид, који садржи регулаторне елементе неопходне за транскрипцију (нпр. секвенцу промотера). Овај плазмид служи као шаблон за ин витро транскрипцију.
4. Ин витро транскрипција: Коришћењем припремљеног шаблона плазмида, врши се ин витро транскрипција да би се синтетизовала еГФП мРНА. Овај процес укључује употребу ензима РНК полимеразе, који препознају секвенцу промотера и иницирају транскрипцију, производећи комплементарни РНК ланац ДНК шаблону. У зависности од жељене примене, мРНА може бити затворена, полиаденилована и/или модификована да би се побољшала стабилност и ефикасност транслације.
5. Пречишћавање и контрола квалитета: Синтетизована еГФП мРНА се затим пречишћава да би се уклонили сви загађивачи, укључујући ДНК, протеине и слободне нуклеотиде. Методе пречишћавања могу укључити гел електрофорезу, хроматографију на колони или одвајање на бази зрна. Након пречишћавања, мРНА се анализира на квалитет, укључујући концентрацију, чистоћу и интегритет, коришћењем техника као што су УВ-Вис спектрофотометрија и гел електрофореза.
6. Складиштење и достава: Пречишћена еГФП мРНА се обично чува на ниским температурама да би се одржала стабилност. За експерименталну употребу, мРНА се може унети у ћелије коришћењем различитих метода, укључујући електропорацију, липофекцију или вирусне векторе, у зависности од специфичне примене и типа циљне ћелије.
7. Изражавање и верификација: Једном у ћелији, еГФП мРНА се преводи у побољшани зелени флуоресцентни протеин, који се може визуелизовати помоћу флуоресцентне микроскопије. Ово омогућава верификацију успешне производње, испоруке и експресије мРНК.

Укратко, производња еГФП мРНК укључује клонирање гена, оптимизацију за експресију, припрему ин витро шаблона за транскрипцију, извођење транскрипционе реакције, пречишћавање резултујуће мРНК и коначно испоруку у ћелије ради експресије и верификације.

Такође активно тражимо институционалне или појединачне глобалне партнере. Нудимо најконкурентнију накнаду у индустрији. Ако имате било каквих питања, слободно нас контактирајте: ЦРО@иаохаибио.цн