کشف رازهای استخراج پلاسمید با کیفیت بالا

استخراج پلاسمید برای محققان بسیار مهم است. پلاسمیدها به عنوان ناقل ژن، در تحقیقات واکسن و ژن درمانی، جایی که کیفیت اهمیت دارد، حیاتی هستند. عوامل کیفیت کلیدی عبارتند از نسبت ابرپیچ و محتوای اندوتوکسین. مقررات متفاوت است: FDA ≥80٪، SMPA ≥85٪، NMPA ≥90٪، با کمتر از 5٪ DNA خطی/دایره ای باز. مشتریان اغلب ≥95% ابرپیچ را ترجیح می دهند. سطوح اندوتوکسین عبارتند از: تحقیق (>50 EU/μg)، ترانسفکشن (<50 EU/μg)، و بدون اندوتوکسین (<0.1 EU/μg).

DNA پلاسمید ابرپیچ

پلاسمیدهای اشریشیا کلی شامل DNA ابرپیچ (SC)، دایره باز (OC) و خطی (L) هستند. نسبت SC بالا راندمان ترانسفکشن و بیان را افزایش می دهد. برای مثال، ترانسفکشن پلاسمید SC 85.45% 2.5 برابر بیشتر است و بیان HGF پلاسمید SC 93.28% 1.8 برابر بیشتر است که برتری SC DNA را تأیید می کند.

DNA دایره ای باز: هنگامی که یک رشته از DNA دو رشته ای می شکند، ساختار فوق سیم پیچ شل می شود و یک پلاسمید دایره باز با حجم بیشتری را تشکیل می دهد که در طول الکتروفورز کمترین سرعت مهاجرت را دارد و در بالای آن قرار می گیرد.

DNA خطی: وقتی هر دو رشته DNA پلاسمید شکسته می‌شوند، ساختار خطی با حجم نسبتاً کمتری تشکیل می‌شود که سریع‌تر از DNA دایره‌ای باز مهاجرت می‌کند، اما کندتر از DNA ابرپیچ‌پیچ، در جایگاه دوم قرار می‌گیرد.

DNA ابرپیچ: دو مارپیچ در هم تنیده شده و به یک ساختار ابرپیچ بر اساس مارپیچ DNA می پیچند. این کوچکترین حجم را دارد و در هنگام الکتروفورز سریعترین حرکت را دارد و در پایین قرار دارد.

تجزیه و تحلیل کمی نسبت ابرپیچ

آزمایشگاه‌ها از الکتروفورز ژل آگارز (AGE) و آنالیز ژل پرو برای قضاوت نسبت ابرپیچ‌ها از طریق تصاویر الکتروفورز استفاده می‌کنند. یک تصویر 97.539٪ SC DNA را نشان می دهد، در حالی که تصویر دیگر 63.833٪ SC و 36.167٪ OC DNA را نشان می دهد (DNA خطی قابل مشاهده نیست).

راز اندوتوکسین در پلاسمیدها

اندوتوکسین جزء لایه بیرونی دیواره سلولی باکتری های گرم منفی است که پس از مرگ یا لیز باکتری آزاد می شود و حاوی لیپوپلی ساکارید سمی A است. در طی استخراج پلاسمید، اندوتوکسین وارد محلول لیز می شود و بر کارایی ترانسفکشن تأثیر می گذارد و پاسخ های ایمنی غیراختصاصی را تحریک می کند که منجر به این می شود. به مثبت کاذب در آزمایشات

تجزیه و تحلیل کمی و کیفی اندوتوکسین

تست لیمولوس آمبوسیت لیزات (LAL) اندوتوکسین را از طریق آگلوتیناسیون با اسید 2-کتو-3-دئوکسیوکتونیک (KDO) در لیپوپلی ساکارید (LPS) شناسایی می کند. این کیفی و نیمه کمی است که نشان دهنده حضور اندوتوکسین از طریق انعقاد یا تغییر رنگ در هنگام مخلوط شدن با نمونه ها است.

Yaohai Bio-Pharma پلاسمیدهای ابرپیچ دار بدون اندوتوکسین را ارائه می دهد. برون سپاری به Yaohai راندمان انتقال و بیان را افزایش می دهد. پلاسمیدهای تحویلی دارای نسبت SC ≥95% (متوسط ​​85±10%) و سطوح اندوتوکسین ≤0.1، ≤0.01، یا ≤0.005 EU/μg هستند.

ما همچنین به طور فعال به دنبال شرکای جهانی نهادی یا فردی هستیم. ما رقابتی ترین پاداش را در صنعت ارائه می دهیم. اگر سوالی دارید، لطفا با ما تماس بگیرید: [email protected]