Παραγωγή Ανασυνδυασμένης Πρωτεΐνης: Κατασκευασμένα στελέχη E. coli

Το Escherichia coli (E. coli) έχει παίξει σημαντικό ρόλο στην παραγωγή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών στη βιοφαρμακευτική βιομηχανία, χρησιμεύοντας ως ο πρώτος φορέας έκφρασης για την παραγωγή βιολογικών φαρμάκων. Το E. coli διαθέτει ταχεία ανάπτυξη, βολικό γενετικό χειρισμό και ταχεία σύνθεση ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών, μεταξύ άλλων πλεονεκτημάτων. Οι εκτεταμένες τροποποιήσεις έχουν καταστήσει το E. coli μια βέλτιστη επιλογή για έκφραση πρωτεϊνών, οδηγώντας στο σχεδιασμό διαφόρων κατασκευασμένων στελεχών του E. coli.

Η Yaohai Bio-Pharma ειδικεύεται στην παροχή υπηρεσιών εξωτερικής ανάθεσης μίας στάσης για τη ζύμωση, τον καθαρισμό, την ανάπτυξη της διαδικασίας σύνθεσης και την παραγωγή μιας σειράς βιοφαρμακευτικών προϊόντων που χρησιμοποιούν συστήματα έκφρασης E. coli. Όσον αφορά την εκτεταμένη εμπειρία του Yaohai, συνοψίσαμε ότι τέσσερα κοινά στελέχη E. coli χρησιμοποιούνται για την παραγωγή ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης και τα χαρακτηριστικά τους.

BL 21 στέλεχος

Προερχόμενο από τη γενεαλογία E. coli B, το στέλεχος BL21 στερείται πρωτεάσης Lon και πρωτεάσης εξωτερικής μεμβράνης OmpT. Η πρωτεάση Lon αποικοδομεί πρωτίστως τις εξωγενείς πρωτεΐνες, ενώ το OmpT αποικοδομεί κυρίως τις εξωκυτταρικές πρωτεΐνες. Η απουσία αυτών των δύο βασικών πρωτεασών μπορεί να αποτρέψει αποτελεσματικά την αποικοδόμηση των ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών.

Στέλεχος Origami

Το στέλεχος Origami, ένα παράγωγο του E. coli K-12, έχει μεταλλάξεις στην αναγωγάση θειορεδοξίνης και στην αναγωγάση της γλουταθειόνης, οι οποίες διευκολύνουν το σχηματισμό σωστά διπλωμένων πρωτεϊνών που περιέχουν δισουλφιδικούς δεσμούς και ενισχύουν τη διαλυτότητα των πρωτεϊνών. Το στέλεχος Origami, συμπεριλαμβανομένων των Origami, Origami 2 και Origami B, είναι κατάλληλο για την έκφραση ενεργών πρωτεϊνών που περιέχουν δισουλφιδικούς δεσμούς.

Ανακατέψτε το στέλεχος

Το στέλεχος SHuffle εκφράζει συστατικά την ισομεράση του δισουλφιδικού δεσμού DsbC στο κυτταρόπλασμα, προάγοντας το σχηματισμό σωστών δισουλφιδικών δεσμών σε οξειδωμένες πρωτεΐνες. Χρησιμεύει επίσης ως μοριακός συνοδός για αναδίπλωση πρωτεϊνών, βοηθώντας στο σχηματισμό της σωστής διαμόρφωσης.

Στέλεχος Rosetta

Το στέλεχος Rosetta συμπληρώνει το E. coli με tRNA που αντιστοιχούν σε σπάνια κωδικόνια, με στόχο τη βελτίωση του επιπέδου έκφρασης εξωγενών γονιδίων, ιδιαίτερα ευκαρυωτικών γονιδίων, σε προκαρυωτικά συστήματα. Προέρχεται από το BL21 και φέρει το ανθεκτικό στη χλωραμφαινικόλη πλασμίδιο pRARE, συμπληρώνει έξι tRNA που αντιστοιχούν σε σπάνια κωδικόνια (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC και GGA) που αρχικά απουσίαζαν στο E. coli, παρέχοντας μια πιο «καθολική» έκφραση πρωτεΐνης.

Συμπέρασμα

Οι τρεις κύριοι παράγοντες για την επιτυχή παραγωγή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών είναι οι συνθήκες ξενιστή, φορέα και καλλιέργειας. Με βάση την κατανόηση των φυσικοχημικών ιδιοτήτων της ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης, τα μοναδικά πλεονεκτήματα κάθε στελέχους και τις ειδικές ανάγκες του πειράματος, θα πρέπει να επιλεγεί ο καταλληλότερος ξενιστής. Επιπρόσθετα, παράγοντες όπως οι φορείς πλασμιδίου, η θερμοκρασία και οι επαγωγείς θα πρέπει να βελτιστοποιηθούν για να ενισχυθεί η έκφραση πρωτεΐνης.

Η Yaohai Bio-Pharma αναζητά επίσης ενεργά θεσμικούς ή μεμονωμένους παγκόσμιους εταίρους και προσφέρει την πιο ανταγωνιστική αποζημίωση στον κλάδο. Εάν έχετε οποιεσδήποτε ερωτήσεις, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας: [email protected]