Παραγωγή Αναδιπλασιασμένων Πρωτεϊνών: Διαμορφωμένες Συνδυασμού E. coli

Το Escherichia coli (E. coli) έχει παίξει σημαντικό ρόλο στην παραγωγή αναδιπλασιασμένων πρωτεϊνών στη βιοφαρμακευτική βιομηχανία, λειτουργώντας ως ο πρώτος διάνοιγμα εκφώνησης για την κατασκευή βιολογικού φαρμάκου. Το E. coli διαθέτει γρήγορη ανάπτυξη, εύκολη γενετική μεταβολή και γρήγορη σύνθεση αναδιπλασιασμένων πρωτεϊνών, μεταξύ άλλων πλεονεκτημάτων. Εκτεταμένες τροποποιήσεις έχουν κάνει το E. coli μια αποτελεσματική επιλογή για την εκφώνηση πρωτεϊνών, οδηγώντας στη σχεδίαση διάφορων μηχανικώς τροποποιημένων στεφάνων E. coli.

Η Yaohai Bio-Pharma ειδικεύεται στην παροχή υπηρεσιών ενιαίας εξωτερικής εργασίας για τη ζύμωση, καθαρισμό, ανάπτυξη διαδικασίας διατύπωσης και παραγωγής μιας σειράς βιοφαρμακευτικών προϊόντων χρησιμοποιώντας συστήματα εκφώνησης E. coli. Σε σχέση με την εκτεταμένη εμπειρία της Yaohai, συνοψίσαμε ότι τέσσερις κοινές στεφάνες E. coli χρησιμοποιούνται για την παραγωγή αναδιπλασιασμένων πρωτεϊνών και τις ιδιότητές τους.

Στεφάνη BL 21

Προέλασε από τη γενεαλογική γραμμή E. coli B, η φυλή BL21 έχει έλλειψη των πρωτεάσων Lon και εξωτερικής μεμβράνης OmpT. Η πρωτεάσα Lon καταστρέφει κυρίως ξένα πρωτεΐνα, ενώ η OmpT καταστρέφει κυρίως πρωτεΐνες του εξωτερικού ματρίκιου. Η έλλειψη αυτών των δύο κλειδιαίων πρωτεάσων μπορεί να αποτρέψει αποτελεσματικά την κατάρρευση αναδρομικών πρωτεινών.

Φυλή Origami

Η φυλή Origami, μια παράγωγη του E. coli K-12, έχει μεταλλαγές στην θιορεδοξινη ρεδούκταση και την γλουταθαϊνη ρεδούκταση, οι οποίες επιτρέπουν τη δημιουργία σωστά συμπλεγμένων πρωτεινών με δεσμούς διασυρμάνθρασης και ενισχύουν τη λύσιμη ικανότητα των πρωτεινών. Οι φυλές Origami, συμπεριλαμβανομένων των Origami, Origami 2 και Origami B, είναι κατάλληλες για την έκφραση ενεργών πρωτεινών που περιέχουν δεσμούς διασυρμάνθρασης.

Φυλή SHuffle

Η φυλή SHuffle εκφράζει συντελεστικά το διςθιόειδος ισομεριστή DsbC στο κυτοπλάσμα, προωθώντας την δημιουργία σωστών δεσμών διςθιόειδους σε πρωτεΐνες που έχουν υποστεί οξέωση. Διαδραματίζει επίσης ρόλο μοριακού επιμελητή για την καταπλόκη πρωτεϊνών, βοηθώντας στην δημιουργία της σωστής συγκρότησης.

Φυλή Rosetta

Η φυλή Rosetta ενισχύει το E. coli με tRNA που αντιστοιχούν σε σπάνια κώδονα, με σκοπό να βελτιώσει το επίπεδο εκφράσεως ξένων γενών, ειδικά ευκαρυωτικών γενών, σε προκαρυοτικά συστήματα. Προέρχεται από την BL21 και φέρει το πλάσμα pRARE που έχει αντοχή στο χλωραμφενικόλ, ενισχύοντας έξι tRNA που αντιστοιχούν σε σπάνια κώδονα (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC και GGA) που απούσιαζαν αρχικά στο E. coli, παρέχοντας μια πιο «παγκόσμια» εκφώνηση πρωτεϊνών.

Συμπέρασμα

Οι τρεις κύριες παράγοντες για μια επιτυχή παραγωγή αναδρομικών πρωτεϊνών είναι ο φορέας, ο διανοστητής και οι συνθήκες κουλτούρας. Βάσει της κατανόησης των φυσικοχημικών ιδιοτήτων της αναδρομικής πρωτεΐνης, των μοναδικών προβλεψιών κάθε στρατιώτη και των συγκεκριμένων αναγκών του πειράματος, θα πρέπει να επιλεγεί ο πιο κατάλληλος φορέας. Επιπλέον, παράγοντες όπως οι πλάσμιδες διανοστητές, η θερμοκρασία και οι καταστιβαντές θα πρέπει να βελτιωθούν για να ενισχυθεί η έκφραση της πρωτεΐνης.

Το Yaohai Bio-Pharma αναζητά ενεργά παγκόσμιους εταίρους, θεσμικούς ή ιδιώτες, και προσφέρει την πιο ανταγωνιστική αποδοχή στη βιομηχανία. Εάν έχετε οποιαδήποτε ερώτηση, μην διστάσετε να μας επικοινωνήσετε: [email protected]