Ποιοτικός Έλεγχος και Εφαρμογές Ανασυνδυασμένων Πρωτεϊνών

Ο ποιοτικός έλεγχος των ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών είναι ζωτικής σημασίας για την αξιοπιστία και την αναπαραγωγιμότητα των πειραματικών δεδομένων. Κάθε βήμα, από το σχεδιασμό του έργου έως τη διαδικασία παραγωγής, απαιτεί αυστηρές στρατηγικές ποιοτικού ελέγχου.

Στρατηγικές Ποιοτικού Ελέγχου

Ο βιομηχανικός τομέας τηρεί αυστηρές τυπικές διαδικασίες λειτουργίας, ενώ η ακαδημαϊκή κοινότητα χρειάζεται να ενισχύσει τις επαγγελματικές γνώσεις για να βελτιώσει την αναπαραγωγιμότητα των δεδομένων. Οι πρωτεΐνες με συγκεκριμένες βιολογικές εφαρμογές ή βιοχημικά χαρακτηριστικά απαιτούν προσαρμοσμένες στρατηγικές ποιοτικού ελέγχου (QC).

Προκλητικά παραδείγματα και λύσεις

Η Yaohai Bio-Pharma διαθέτει εκτενή εμπειρία στην παραγωγή και καθαρισμό ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης, σε συνδυασμό με μια ομάδα ειδικών, διασφαλίζοντας ότι η παραγωγή πρωτεΐνης σας ολοκληρώνεται με υψηλή καθαρότητα. Αξιοποιώντας την εμπειρία μας από εκατοντάδες έργα, η Yaohai συνοψίζει ευγενικά τον τρόπο βελτιστοποίησης του καθαρισμού πρωτεΐνης.

Πρωτεΐνες που δεσμεύουν νουκλεϊκό οξύ: Τα βήματα απομάκρυνσης νουκλεϊκού οξέος, όπως νουκλεάσες ή καταβύθιση PEI, είναι απαραίτητα. Η αναλογία A260nm/A280nm παρακολουθείται για την ανίχνευση μόλυνσης από νουκλεϊκό οξύ.

Mouse Ferritin Heavy Chain 1 για cryo-EM: Τα βήματα καθαρισμού πρέπει να βελτιστοποιηθούν και πρέπει να προστεθούν νουκλεάσες για να μειωθεί η αναλογία A260nm/A280nm και να διασφαλιστεί η καθαρότητα της πρωτεΐνης.

Ανθρώπινη χιμαιρική πρωτεΐνη dsRBEC: Η λύση των κυττάρων χρησιμοποιεί ένα ρυθμιστικό διάλυμα που περιέχει ουρία, που ακολουθείται από αναδίπλωση στη στήλη για τη λήψη λειτουργικά ενεργών πρωτεϊνών.

Πρωτεΐνες που δεσμεύουν δισθενή κατιόντα: Πρέπει να προστεθούν ειδικά δισθενή κατιόντα κατά την έκφραση και τον καθαρισμό και θα πρέπει να αποφεύγονται οι χηλικοί παράγοντες.

Πρωτεΐνες σιδήρου-θείου: Η ιμιδαζόλη θα πρέπει να αποφεύγεται για να αποφευχθεί η διαταραχή του συμπλέγματος [2Fe ± 2S], διασφαλίζοντας τη σωστή αναδίπλωση και λειτουργία της πρωτεΐνης.

Διαλυτό θραύσμα LLT1: Ο μεταλλαγμένος σχεδιασμός βελτιστοποιεί το σχηματισμό δισουλφιδικού δεσμού και την αναδίπλωση των πρωτεϊνών, με αποτέλεσμα σταθερές και υψηλής απόδοσης πρωτεΐνες.

Κρυστάλλωση κινάσης CLK1: Η ταυτόχρονη έκφραση με λ-φωσφατάση απομακρύνει τα φωσφορικά άλατα από τις θέσεις φωσφορυλίωσης και η χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους (SEC) και η χρωματογραφία ανταλλαγής ανιόντων χρησιμοποιούνται για τη λήψη ομοιογενούς CLK1 χωρίς ετερογενή φωσφορυλίωση.

Πρωτεΐνες για χρήση αντιγόνων: Η αξιολόγηση της καθαρότητας είναι απαραίτητη για την αποφυγή μόλυνσης με πρωτεΐνες υψηλής ανοσογονικότητας. Για αντισώματα δομικού επιτόπου, η τρισδιάστατη διαμόρφωση του αντιγόνου πρέπει να διατηρηθεί.

Πρωτεΐνες με τάση συσσωμάτωσης: Στρατηγικές όπως ο έλεγχος διαφορετικών στελεχών και η μείωση των θερμοκρασιών καλλιέργειας χρησιμοποιούνται για τον περιορισμό των προβλημάτων συσσωμάτωσης και σχεδιάζονται στρατηγικές γρήγορου καθαρισμού.

Αφαίρεση ενδοτοξίνης: Μέθοδοι όπως η χρωματογραφία θετικού φορτίου και η χρωματογραφία συγγένειας προσδέματος πολυκατιόντος αφαιρούν τις ενδοτοξίνες, διασφαλίζοντας ότι τα επίπεδα LPS είναι κάτω από τα όρια εφαρμογής.

Συμπλέγματα πρωτεϊνών: Οι υπομονάδες εκφράζονται χωριστά και συναρμολογούνται in vitro ή συνεκφράζονται για να σχηματίσουν λειτουργικά σύμπλοκα. Η ακεραιότητα του συμπλέγματος αξιολογείται από την ομοιογένεια και τη μοριακή μάζα.

Συμπέρασμα

Η παραγωγή πρωτεΐνης ξεκινά με στρατηγικό σχεδιασμό, λαμβάνοντας υπόψη τα βιοχημικά χαρακτηριστικά και τις εφαρμογές. Κατά τη διάρκεια της έκφρασης, του καθαρισμού και του QC, οι συνθήκες και οι μέθοδοι βελτιστοποιούνται για σταθερότητα, μη συσσωμάτωση και φυσική κατάσταση. Οι καθαρισμένες πρωτεΐνες εξυπηρετούν διάφορες κατάντη χρήσεις, όπως ο βιοφυσικός χαρακτηρισμός.

Η Yaohai Bio-Pharma αναζητά επίσης ενεργά θεσμικούς ή μεμονωμένους παγκόσμιους εταίρους και προσφέρει την πιο ανταγωνιστική αποζημίωση στον κλάδο. Εάν έχετε οποιεσδήποτε ερωτήσεις, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας: [email protected]