Βελτιστοποίηση της διαδικασίας καθαρισμού για την ανασυνδυασμένη ανθρώπινη ινσουλίνη

Τα τελευταία χρόνια, η ανάπτυξη ασθενών με διαβήτη έχει οδηγήσει στη ζήτηση ινσουλίνης, αλλά η προσιτή ινσουλίνη είναι ελλιπής. Η αποτελεσματική, οικονομική παραγωγή ινσουλίνης είναι ζωτικής σημασίας. Παράγεται κυρίως μέσω Escherichia coli (E. coli) και ζυμομύκητα λόγω της ταχείας ανάπτυξης και του χαμηλού κόστους, το E. coli αντιμετωπίζει πολύπλοκη επεξεργασία κατάντη.

Επισκόπηση της μεταγενέστερης επεξεργασίας:

Ο καθαρισμός ανασυνδυασμένης ανθρώπινης ινσουλίνης από σωμάτια εγκλεισμού Ε. coli περιλαμβάνει πολλαπλά στάδια, συμπεριλαμβανομένης της ανάκτησης, της πλύσης, της διαλυτοποίησης και της οξείδωσης, της διάσπασης, της ανταλλαγής ρυθμιστικού διαλύματος, του χρωματογραφικού καθαρισμού, της κατακρήμνισης, της αναδιάταξης, της ενζυμικής διάσπασης και της σύνθεσης.

Η Yaohai Bio-Pharma διαθέτει εκτενή εμπειρία στην παραγωγή και καθαρισμό ανασυνδυασμένης ινσουλίνης, σε συνδυασμό με μια ομάδα ειδικών, διασφαλίζοντας ότι η παραγωγή ινσουλίνης σας ολοκληρώνεται με υψηλή απόδοση. Αξιοποιώντας την εμπειρία μας από εκατοντάδες έργα, η Yaohai συνοψίζει ευγενικά τον τρόπο βελτιστοποίησης της Διαδικασίας Καθαρισμού Downstream για την Ανασυνδυασμένη Ανθρώπινη Ινσουλίνη.

Αποκατάσταση και πλύση σώματος εγκλεισμού:

Τα κύτταρα διασπώνται χρησιμοποιώντας μηχανικές μεθόδους (όπως υπερήχους, ομογενοποίηση υψηλής πίεσης) ή επεξεργασία με λυσοζύμη, ακολουθούμενη από ρυθμιστικά διαλύματα πλύσης (που περιέχουν ουρία, Triton X-100, κ.λπ.) για την απομάκρυνση των ακαθαρσιών. Κατά τη διάρκεια του πλυσίματος, οι παράμετροι πρέπει να βελτιστοποιηθούν για να διασφαλιστεί η ποιότητα της πρωτεΐνης, ενώ ελέγχεται το κόστος.

Διαλυτοποίηση και οξείδωση σώματος εγκλεισμού:

Υψηλής συγκέντρωσης μετουσιωτικά (όπως υδροχλωρική γουανιδίνη και ουρία) χρησιμοποιούνται για τη διαλυτοποίηση σωμάτων εγκλεισμού, με προσθήκη διθειοθρεϊτόλης ή β-μερκαπτοαιθανόλης για την πρόληψη του σχηματισμού εσφαλμένων δισουλφιδικών δεσμών. Το pH και η θερμοκρασία επηρεάζουν σημαντικά τις αντιδράσεις διαλυτοποίησης και οξείδωσης.

Διάσπαση και ανταλλαγή buffer:

Η διάσπαση βρωμιούχου κυανογόνου χρησιμοποιείται για την αφαίρεση του αμινοξέος έναρξης του Ν-τερματικού, αλλά δημιουργεί προβλήματα τοξικότητας και χαμηλής ειδικότητας. Μέσω της αιμοκάθαρσης, της υπερδιήθησης ή της χρωματογραφίας αποκλεισμού μεγέθους, η ανταλλαγή ρυθμιστικού διαλύματος αφαιρεί τα επιβλαβή αντιδραστήρια κατά την προετοιμασία για τις επόμενες λειτουργίες.

Χρωματογραφικός καθαρισμός και καθίζηση:

Χρησιμοποιούνται πολλαπλές χρωματογραφικές τεχνικές για τον καθαρισμό της ινσουλίνης, συμπεριλαμβανομένης της χρωματογραφίας συγγένειας, της χρωματογραφίας ανταλλαγής ιόντων, της χρωματογραφίας ανάστροφης φάσης, της χρωματογραφίας υδρόφοβης αλληλεπίδρασης και της χρωματογραφίας αποκλεισμού μεγέθους. Μέθοδοι καθίζησης, όπως η κατακρήμνιση του pH και η κρυστάλλωση ψευδαργύρου, χρησιμοποιούνται για την απομάκρυνση των ακαθαρσιών και τη συμπύκνωση πρωτεϊνών.

Renaturation:

Η διαλυτοποιημένη πρωτεΐνη αραιώνεται σε ένα ρυθμιστικό διάλυμα επαναδιάταξης για να προωθήσει τον σωστό σχηματισμό δισουλφιδικών δεσμών και την αναδίπλωση πρωτεΐνης. Η υγρή χρωματογραφία αναδίπλωσης πρωτεΐνης και η αιμοκάθαρση είναι επίσης μέθοδοι που χρησιμοποιούνται για την επαναδιάταξη.

Ενζυματική διάσπαση και σύνθεση:

Η θρυψίνη και η καρβοξυπεπτιδάση Β χρησιμοποιούνται για τη διάσπαση του C-πεπτιδίου, σχηματίζοντας το ενεργό ετεροδιμερές ινσουλίνης. Τέλος, η κρυστάλλωση και η λυοφιλοποίηση χρησιμοποιούνται για την απομάκρυνση των υπολειμματικών αλάτων και ρυθμιστικών διαλυμάτων, παρασκευάζοντας μια σταθερή σύνθεση. Ειδικά πρόσθετα (όπως ψευδάργυρος και πρωταμίνη) προστίθενται για την κάλυψη διαφορετικών κλινικών αναγκών.

Συμπέρασμα:

Κατάντη επεξεργασία ινσουλίνης από Ε. coli είναι πολύπλοκο. Η μελλοντική εστίαση θα πρέπει να είναι στη βελτιστοποίηση αυτών των βημάτων για αποτελεσματική, οικονομική παραγωγή για την κάλυψη της ζήτησης και τη μείωση του κόστους.

Η Yaohai Bio-Pharma αναζητά επίσης ενεργά θεσμικούς ή μεμονωμένους παγκόσμιους εταίρους και προσφέρει την πιο ανταγωνιστική αποζημίωση στον κλάδο. Εάν έχετε οποιεσδήποτε ερωτήσεις, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας: [email protected]