Βελτίωση της ολικότητας κυττάρων E. coli για την παραγωγή βιοφαρμάκων

Στον τομέα των βιοφαρμακευτικών, η Escherichia coli (E. coli) διαδραματίζει κρίσιμο ρόλο ως φιλοξενούς για την έκφραση αναδιπλασιασμένων πρωτεϊνών. Η κυτταρική ακεραιότητα της E. coli είναι καθοριστική για την παραγωγικότητα, την ποιότητα και τους κόστους παραγωγής. Αυτή η ακεραιότητα αφορά κυρίως τη δομή και λειτουργία της εσωτερικής μεμβράνης (IM) και της εξωτερικής μεμβράνης (OM).

Η Yaohai Bio-Pharma διαθέτει 15 χρόνια εμπειρίας στη φθορά E. coli και την έκφραση αναδιπλασιασμένων πρωτεϊνών. Χρησιμοποιούμε διάφορες στρατηγικές για να διατηρούμε υψηλή κυτταρική ακεραιότητα της E. coli, με απόδοση πλάσματος πάνω από 1g/L μέσα σε ένα κύκλο καλλιέργειας των 30 ωρών. Βασικά στην εκτεταμένη εμπειρία στην έκφραση μικροοργανισμών, η Yaohai Bio-Pharma έχει συγκεντρώσει αρκετές αποτελεσματικές στρατηγικές για την παρακολούθηση και βελτίωση της κυτταρικής ακεραιότητας της E. coli κατά τη διάρκεια της βιοφαρμακευτικής παραγωγής.

Τεχνικές για την παρακολούθηση της κυτταρικής ακεραιότητας της E. coli

Διαφωτισμός Κυττάρων: Χρησιμοποιεί φθορικά χρωματικά για να διαχωρίζει κυτταρικές καταστάσεις, όπως το προπίδιο ιώδιο για την ανίχνευση της κυτταρικής ενδιαφέρειας και το SYTO9 για την αξιολόγηση της διαβασιμότητας του OM. Ωστόσο, απαιτεί υψηλό κόστος για τα χρωματικά και πολύπλοκες λειτουργίες.

Χρωματικές Μέθοδοι: Αντικατοπτρίζουν την λύση κυττάρων μέσω της ανίχνευσης του περιεχομένου DNA, των ενζυματικών δραστηριοτήτων κλπ., στον υπερβολικό, όπως η χρήση του φαρμακευτικού συνόλου PicoGreen και των δοκιμαστικών για την δραστηριότητα της αλκαλινής φοσφατάσης. Αυτές οι μέθοδοι, ωστόσο, είναι βαρειές και απαιτούν ακριβά υψηλού κόστους χημικά.

Υψηλής Απόδοσης Υγρή Χρωματογράφηση: Χρησιμοποιείται για την αποσπάσιμη ανίχνευση των συγκεντρώσεων εξωκυτταρικών προϊόντων για να αξιολογηθεί η διαβασιμότητα του OM. Ωστόσο, η αυτομάτευσή της είναι πολύπλοκη και ο χρόνος ανάλυσης είναι μεγάλος.

Τεχνικές Σεισμού Φθοντιρμάτων: Όπως η κοντινοίρα και μεσοίρα σεισμού, οι οποίες έχουν δυνατότητα εφαρμογών αλλά απαιτούν να επιλυθούν προβλήματα σεισμικής διαταραχής και ανάλυσης δεδομένων.

Ηλεκτροδυναμική Φασματογράφηση: Αξιολογεί την ακεραιότητα των μεμβράνων μέτρουμα την αντιστάση των κυτταρικών σύσπενσεων, επιτρέποντας πραγματική επιθεώρηση σε πραγματικό χρόνο. Ωστόσο, είναι ευαίσθητη σε διαταραγμένες επιδράσεις και η καλιβροποίηση είναι δύσκολη.

Βιοαισθητήρες: Μπορούν να ανιχνεύσουν ουσίες που έχουν διαρρεύσει από τα εσωτερικά των κυττάρων ή το περιπλάσμα, αλλά αντιμετωπίζουν προβλήματα όπως οι δυσκολίες αναγεννήσεως των αισθητήρων.

Μέτρηση Ροπής και Πυκνότητας: Χαμηλή σε κόστος και γρήγορη στην ανάλυση, αλλά έχουν έλλειψη επιλεκτικότητας και απαιτείται να ληφθούν υπόψη πολλαπλά δεδομένα παραγωγής για την αξιολόγηση.

Παράγοντες που επηρεάζουν την κυτταρική ακεραιότητα

Διαμόρφωση Σύντονων: Αλλάζει την ακεραιότητα του Εξωτερικού Μεσοτικού (OM) μέσω γενετικής μεταμόρφωσης, όπως η μεταλλαγή γενών λιποπρωτεϊνών, αλλά μπορεί να επηρεάσει την αύξηση του σύντονου.

Επαγωγική Τάση: Η υπερφορτίωση αναδιπλασιασμένων πρωτεΐνων οδηγεί σε μεταβολικό φορτίο, επηρεάζοντας την κυτταρική φυσιολογία. Για αυτόν τον λόγο, είναι απαραίτητη η λογική ρύθμιση των επιπέδων εκφώνησης.

Ρυθμός Διατροφικής Εγχώρησης: Και οι υπερβολικά υψηλοί και οι χαμηλοί ρυθμοί εγχώρησης επηρεάζουν την κυτταρική λύση και την ακεραιότητα του Εξωτερικού Μεσοτικού.

Θερμοκρασία και Αεριοποίηση: Υψηλές θερμοκρασίες και χαμηλή διαθεσιμότητα οξυγόνου αυξάνουν τον στρες εκφράσεων και τη ρύπανση OM αντίστοιχα, αλλά οι συγκεκριμένες επιδράσεις παριστάνονται διαφορετικά.

Οσμωτικότητα: Χρησιμοποιείται για να ελευθερώσει πρωτεΐνες περιπλασματικού, αλλά βλάπτουν τη βιωσιμότητα των κυττάρων, περιορίζοντας τη χρήση τους.

Συμπέρασμα Μελλοντική έρευνα πρέπει να εξετάσει βαθύτερα τους μηχανισμούς και τις συνθήκες της επισκευής μεμβράνης για να ελέγξει με ακρίβεια την ακεραιότητα της κυτταρικής μεμβράνης. Η βελτίωση των μεθόδων παρακολούθησης και η ανάλυση των παραγόντων επίδρασης αναμένεται να βελτιώσει την ποιότητα του προϊόντος, έτσι ώστε να υποστηρίξει την ανάπτυξη της βιοφαρμακευτικής βιομηχανίας.

Είμαστε επίσης ενεργά σε αναζήτηση ιδρυματικών ή μεμονωμένων παγκόσμιων εταίρων. Προσφέρουμε την καλύτερη ανταγωνιστική αποδοχή στον τομέα. Εάν έχετε οποιαδήποτε ερώτηση, μην διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας στο BD@yaohaibio.cn